Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N 5039-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НИССОРАНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ,
РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ (ЗЕЛЕНАЯ МАССА И ПЛОДЫ
ВИНОГРАДА, ЯБЛОКИ) МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ
И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны Т.М. Петровой, О.К.
Остроуховой (ВИЗР); Н.В. Бажановой, Ж.А. Арутюнян, М.Г. Алтунян
(АрмНИИЗР).
Краткая
характеристика препарата. Ниссоран -
инсектицид. Действующее
вещество -
транс-5-[4-хлорфенил]-N-циклогексил-4-метил-2-оксотиазолидин-3-
карбоксамид.
Брутто-формула C H ClN O S . Молекулярная
масса 352,9.
17 2 2 2 2
Общепринятое
название - гексатиазокс. Химически
чистое вещество - белый
порошок. Т. пл.
105,5 °C. Растворимость в воде при pH 5,9 - 1 мг/мл.
Период
полураспада в
водном растворе при 22 °C и pH 5 - 7 составляет 7000 ч;
при
pH 9 - 12 - 12000 ч. Растворяется в большинстве
органических растворителей.
Ниссоран относится к группе препаратов средней токсичности для теплокровных
животных. Применяют в борьбе с клещами на плодовых,
цитрусовых насаждениях
и на
виноградниках.
Принцип метода. Метод основан на
экстракции ниссорана из проб органическим растворителем,
очистке переэкстракцией и количественном определении
методами ТСХ или ГЖХ с ДЭЗ или ДПР.
Метрологическая характеристика метода
приведена в таблице 129.
Таблица 129
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА (p = 0,95,
n = 5)
┌───────────────┬──────────────────┬───────────────────┬──────────────────┐
│
Анализируемый │ Минимально │
Нижний предел │ Среднее
значение │
│ объект
│ детектируемое │
определения, │ определения, % │
│ │ количество, мкг │
мг/л или мг/кг │ │
├───────────────┴──────────────────┴───────────────────┴──────────────────┤
│ Тонкослойная
хроматография │
│
│
│Вода │1 │0,02 │93,0 +/- 1,8 │
│Почва │10 │0,1 │77,0 +/- 3,7 │
│Яблоки │5 │0,2 │78,0 +/- 3,0 │
│Виноград │3 │0,1 │82,0 +/- 2,2 │
│
│
│ Газожидкостная
хроматография │
│
│
│Вода │ │0,0005 │94,0 +/- 2,0 │
│Почва │ │0,02 │76,0 +/- 3,2 │
│Яблоки │ │0,02 │76,0 +/- 3,6 │
└───────────────┴──────────────────┴───────────────────┴──────────────────┘
Избирательность метода. Избирательность
метода ГЖХ обеспечивается сочетанием селективных детекторов и неподвижных фаз
различной полярности, а ТСХ - выбором систем хроматографирования
и проявляющих реагентов. В предлагаемых условиях хроматографирования
другие пестициды определению не мешают.
Реактивы
и растворы. Ацетон
х.ч. Ацетонитрил ч. н-Гексан х.ч.
Двухромовокислый калий х.ч. Йодид
калия ч. Марганцовокислый калий х.ч.
Сульфат кальция двухводный ч.д.а. (в течение 1
- 2 сут. прокаливают
при
температуре 180
°C и просеивают
через сито размером 100 меш, хранят
в
склянке с
притертой крышкой). Хлорид
кальция ч. Крахмал растворимый ч.
Едкий натр ч. Сульфат натрия
безводный ч.д.а.
(предварительно прокаливают
до 300
- 400 °C).
Хлорид натрия ч.д.а. Петролейный эфир
(40 - 70 °C)
свежеперегнанный. Хроматографические пластинки
"Силуфол" УФ .
Серная
254
кислота ч.д.а. Силикатный
сорбент КМК-20. Силикагель
марки КСК.
Хлороводородная
кислота особой чистоты.
Хлороформ х.ч. Этиловый спирт
ректиф.
Неподвижная жидкая фаза: 5% SE-30
или 5% XE-60 на хроматоне
N-AW-DMCS (0,160
- 0,200 мм). Газ-носитель -
азот особой чистоты.
Стандартный раствор
ниссорана
в н-гексане - 5 мкг/мл (ГЖХ), 200 мкг/мл
(ТСХ). Растворы
стабильны в течение 3 мес. при хранении
в холодильнике.
Проявляющий
реагент: 50 мл 1-процентного раствора
йодида калия смешивают
с 50 мл 3-процентного свежеприготовленного растворимого крахмала и 20 мл
этилового
спирта. Готовят перед употреблением.
Приборы, аппаратура и посуда. Аппарат для
встряхивания колб. Ротационный вакуумный испаритель. Вата гигроскопическая.
Весы аналитические. Весы равноплечие ручные. Воронки делительные; химические.
Газовый хроматограф с ДЭЗ пли ДПР. Камера для хроматографирования. Колбы мерные и конические со шлифами.
Микропипетки на 0,1 и 0,2 мл. Микрошприц на 10 мкл. Пипетки на 1 и 10 мл. Пульверизатор стеклянный для
обработки хроматограмм. Сушильный шкаф. Холодильник
бытовой. Камера для опрыскивания хроматографических
пластинок. Хроматографическая стеклянная колонка длиной
1 м, внутренним диаметром 3 мм.
Подготовка к определению. Приготовление
пластинок для ТСХ. Стеклянные пластинки перед нанесением на них сорбента
тщательно моют сначала в хромовой смеси, затем промывают водой до нейтральной
реакции. Далее их протирают спиртом и высушивают на воздухе. Нанесение сорбента
КМК-20: для приготовления одной пластинки (9 x 12 см) берут 0,7 г сорбента
КМК-20, прибавляют 5 мл воды и 10% от массы сорбента гипса. Готовят их сразу в
количестве 10 - 20. Смесь тщательно растирают и однородную массу наносят на
пластинку легким покачиванием для растекания по всей поверхности. Сушат
пластинки в течение 24 ч на воздухе. Хранят в эксикаторе над хлоридом кальция.
Сорбент КМК-20 можно наносить на пластинку и без закрепляющей основы - гипса.
Нанесение силикагеля: 30 г силикагеля, 5 г гипса и 100 мл воды тщательно
размешивают и наносят на пластинку так, как описано выше.
Подготовка хроматографической
колонки (ГЖХ). Стеклянную колонку промывают смесью органических растворителей
ацетон - этиловый спирт - петролейный эфир (1:1:1).
Для этого смесь заливают на 1 ч в колонку, а затем промывают 300 мл ацетона.
Колонку сушат в токе азота и заполняют сорбентом с нанесенной на него фазой с
помощью вакуумного насоса. Колонку кондиционируют при 270 °C в течение 8 ч.
Скорость потока азота 30 - 40 мл/мин.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстракта. Навеску листьев (25 г) измельчают, а яблоки и плоды винограда
гомогенизируют, заливают 150 - 200 мл 75-процентного водного ацетона,
встряхивают в течение 1 ч и оставляют на ночь. Экстракт фильтруют через
бумажный фильтр. Остаток промывают дважды по 30 мл 75-процентным водным
ацетоном. Фильтраты объединяют, помещают их в делительную воронку, добавляют 70
- 90 мл дистиллированной воды и 1 - 3 г хлорида натрия. Очистку проводят переэкстракцией ниссорана в н-гексан тремя порциями по 25 - 30 мл. Гексановые
фракции отделяют, осушают путем фильтрования через безводный сульфат натрия,
переносят в круглодонную колбу и концентрируют под вакуумом при температуре 40
°C до 1 - 5 мл (ГЖХ) или до 0,1 - 0,3 мл (ТСХ).
Навеску почвы (25 г) заливают 70 мл смеси
ацетон - 0,05 н CaCl (1:1),
2
встряхивают 1 ч
и оставляют на ночь. Далее анализ ведут так, как описано
для растительных
проб, но остаток
промывают смесью ацетона и
раствора
хлорида кальция.
К 200 мл анализируемой пробы воды
прибавляют 25 - 30 мл петролейного эфира, закрывают
колбу стеклянной притертой пробкой и встряхивают на аппарате 1 ч. Экстракцию
повторяют трижды. Слои с петролейным эфиром отделяют,
высушивают фильтрованием через слой безводного сульфата натрия. Объединенные
экстракты концентрируют на ротационном испарителе при температуре 40 °C до 1 -
5 мл (ГЖХ) или до 0,1 - 0,3 мл (ТСХ).
Условия
хроматографирования. Условия
определения методом ТСХ:
На
стартовую линию пластинки микропипеткой количественно
наносят пробу, рядом
с пробой - стандартные растворы ниссорана - 5 и 10 мкг. Пластинку помещают
в хроматографическую камеру,
куда за 10
- 15 мин. до этого наливают
подвижный растворитель:
для силикагелевых пластинок используют гексан
-
ацетон (4:1),
а для пластинок
с КМК-20 - гексан
- ацетон (9:1). После
хроматографирования
пластинку высушивают на воздухе, помещают в камеру с
газообразным хлором
на 10 мин., который получают,
смешивая равные объемы
1,5-процентного
раствора калия марганцовокислого и 10-процентного раствора
хлороводородной
кислоты. После этого
пластинку оставляют на воздухе до
полного исчезновения запаха хлора. Затем пластинку опрыскивают
проявляющим
реагентом. Ниссоран проявляется в виде сине-фиолетовых пятен на сероватом
фоне пластинки. В предлагаемых условиях хроматографирования
R ниссорана на
f
пластинках силикагеля - 0,50, а на КМК-20 - 0,45.
Условия определения методом ГЖХ.
Хроматограф с ДЭЗ или ДПР. При работе с колонкой, заполненной 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS (0,125 - 0,160 мм). Температура, °C:
колонки - 240, испарителя и детектора - 270. Скорость газа-носителя (азота) 35
мл/мин. Время удерживания ниссорана в этих условиях 2
мин. 7 с. Минимально детектируемое количество 0,5 нг.
Диапазон линейности 0,5 - 10,0 нг. При работе с
колонкой, заполненной 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS
(0,160 - 0,200 мм). Температура, °C: колонки - 250, испарителя и детектора -
270. Скорость газа-носителя 40 мл/мин. В этих условиях время удерживания
составляет 3 мин. 25 с. Минимально детектируемое количество 0,4 нг. Диапазон линейности 0,5 - 15,0 нг.
Обработка результатов анализа. Метод ТСХ.
Количественное определение производят путем сравнения площадей пятен
стандартных растворов и проб. Пропорциональная зависимость между площадью пятна
и концентрацией соблюдается в пределах 1 - 20 мкг. Концентрацию ниссорана (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество препарата, найденное в
пробе, мкг;
P - навеска или объем анализируемой
пробы, г или мл.
Метод ГЖХ. Содержание ниссорана
в анализируемой пробе (X, мг/кг или мг/л) определяют методом соотношения пиков
стандарта и проб и рассчитывают по формуле:
H CV
2
X = -----,
V H P
1 1
где:
C
- количество препарата
в стандартном растворе,
введенном в
хроматограф, нг;
H , H
- высоты пиков соответственно стандарта и пробы, мм;
1
2
V -
объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, мкл;
1
V - объем анализируемой пробы, мл.
P - навеска пробы, г.
Требования безопасности. Необходимо
соблюдать общепринятые правила предосторожности при работе с токсичными,
взрывоопасными и легковоспламеняющимися веществами.