Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6079-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ ИВИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТА
2,6-ЛУТИДИНА В ВОДЕ, ОВОЩАХ (КАРТОФЕЛЬ, ОГУРЦЫ, ТОМАТЫ)
(Дополнение к "Методическим
указаниям по хроматографическому
определению ивина в воде и овощах" N 4327-87
от 08.06.87)
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах
и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика соединений
Ивин - N-окись 2,6-диметилпиридина
N-окись 2,6-лутидин
/\
// \ C H
NO.
//
\ 7 9
│ ││
/\\
/\
М.м. 123,18.
H C \\N/
CH
3
\/ 3
│
O
Химически чистое вещество представляет
собой бесцветную жидкость со слабым специфическим запахом с температурой
кипения 240 °C. Легко растворяется в воде, спирте, хлороформе, ацетоне и других
органических растворителях.
Ивин - малотоксичное
соединение (ЛД для крыс составляет 1717
50
мг/кг, для мышей
- 1497 мг/кг).
Препарат применяется в виде водных растворов
для предпосевной обработки семян овощных культур или клубней картофеля.
ПДК в воде водоемов 0,02 мг/л, МДУ в
овощах 0,04 мг/кг.
2,6-лутидин
2,6-диметилпиридин
//\
//
\
C H N.
│ ││ 7 9
/\\
/\
H C
\\/ CH М.м. 107,15.
3
│ 3
N
Химически чистое вещество представляет
собой бесцветную жидкость с пиридиновым специфическим запахом. Температура
кипения 144 °C. Растворим в спирте, ацетоне, воде, хлороформе, диэтиловом эфире.
ПДК в воде водоемов и МДУ в пищевых
продуктах не установлены.
2. Методика
определения ивина и его метаболита
2,6-лутидина в воде, овощах
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на извлечении ивина и
2,6-лутидина из подщелоченных проб органическим растворителем, концентрировании
экстрактов, кислотной очистке (овощи) и хроматографировании
в тонком слое силикагеля. Зоны локализации обнаруживаются раствором бромкрезолового пурпурного после ультрафиолетового
облучения пластинок.
2.1.2. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен
в присутствии близких по области применения и структуре следующих соединений: гидрела, дигидрела, хлорхолинхлорида, морфола, морфонола, алара, гибберелина и некоторых производных пиридина-нитрапирина, 6-хлорпиколиновой кислоты, 2-пиколиновой
кислоты, 2,6-дипиколиновой кислоты.
2.1.3. Метрологическая характеристика
методики (n = 5, p = 0,95)
┌─────────┬────────────────────────────────────────────────────────────────────┐
│Анализи- │
Метрологические параметры │
│руемый ├───────┬────────────┬───────────┬───────────┬─────────┬─────────────┤
│объект │предел
│ диапазон │ средний % │стандартное│ доверит.│относительное│
│ │опред.,│определяемых│обнаружения│отклонение
│ интервал│ стандартное │
│ │
мг/кг │ конц., │
_ │ _
│ │
отклонение │
│ │
│ мг/кг (л) │
с │ S
│ E │
Sr, %
│
├─────────┼───────┼────────────┼───────────┼───────────┼─────────┼─────────────┤
│ 1 │
2 │ 3
│ 4 │
5 │ 6 │ 7
│
├─────────┴───────┴────────────┴───────────┴───────────┴─────────┴─────────────┤
│ Ивин │
├─────────┬───────┬────────────┬───────────┬───────────┬─────────┬─────────────┤
│Вода │0,02 │0,02 - 0,1 │98,4
│+/- 2,78 │+/- 1,297│+/- 2,82 │
│Картофель│0,08 │0,08 - 0,1 │94,0 │+/- 3,08 │+/- 3,820│+/- 3,00 │
│Томаты │0,08 │0,08 - 0,1 │93,0 │+/- 2,25 │+/- 2,780│+/- 2,42 │
│Огурцы │0,08 │0,08 - 0,1 │94,0 │+/- 3,37 │+/- 4,170│+/- 3,58 │
├─────────┴───────┴────────────┴───────────┴───────────┴─────────┴─────────────┤
│
2,6-лутидин │
├─────────┬───────┬────────────┬───────────┬───────────┬─────────┬─────────────┤
│Вода │0,04 │0,04 - 0,1 │97,0 │+/- 2,69 │+/- 3,78 │+/- 2,76 │
│Картофель│0,08 │0,08 - 0,1 │85,0 │+/- 1,69 │+/- 1,97 │+/- 1,88 │
│Томаты │0,08 │0,08 - 0,1 │81,0 │+/- 2,83 │+/- 1,17 │+/- 3,49 │
│Огурцы │0,08 │0,08 - 0,1 │83,0 │+/- 2,74 │+/- 1,13 │+/- 3,30 │
└─────────┴───────┴────────────┴───────────┴───────────┴─────────┴─────────────┘
2.2. Реактивы и
материалы
Ивин, хч.
Стандартный раствор в ацетоне, содержащий 100 мкг/мл, хранят в холодильнике не
более 3-х месяцев.
2,6-лутидин, хч.
Стандартный раствор в ацетоне, содержащий 100 мкг/мл, хранят в холодильнике не
более одного месяца.
Хлороформ, хч,
ГОСТ 20015-74.
Ацетон, хч,
ГОСТ 2603-79.
Натр едкий, хч,
ГОСТ 4328-77, 15-процентный водный раствор.
Хлористоводородная кислота конц., ч, ГОСТ 3118-77, 1М водный раствор.
Натрий сернокислый безводный, ч, ГОСТ 4166-76.
Бромкрезоловый пурпурный, чда, ТУ 6-09-1386-76, 0,3%
раствор в 80% этиловом спирте с добавлением на 100 мл 1,5 мл 15% раствора натра
едкого.
Этиловый спирт, хч,
ТУ 6-1710-77.
Бутиловый спирт, чда,
ГОСТ 6006-78.
Муравьиная кислота, чда,
ГОСТ 5848-73.
Пластинки хроматографические
"Силуфол" UV-254 (ЧССР) размером 15 x 15.
2.3. Приборы,
аппаратура, посуда
Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4,
ТУ 16-535-280-74.
Прибор для отгонки растворителей, ТУ
25-11-917-76, тип ИР-1М.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Колбы конические, ГОСТ 20292-74, на 250
мл.
Колбы круглодонные, ГОСТ 25336-82, на 100
мл.
Воронки делительные, ГОСТ 23932-79,
вместимостью 500 мл.
Воронки химические, ГОСТ 23932-79.
Микропипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.
Цилиндры мерные емкостью 50, 100 мл, ГОСТ
1770-74.
Камера хроматографическая,
ГОСТ 25336-82.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-79.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
Отобранные пробы анализировать сразу.
2.5. Описание
определения
2.5.1. Экстракция
Вода. 50 мл воды помещают в коническую
колбу, добавляют 2 мл 15-процентного раствора натра едкого и экстрагируют
хлороформом (30 мл) на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Экстракцию
повторяют еще дважды по 20 мл хлороформом. Объединенный хлороформный экстракт
высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном
испарителе досуха при температуре 30 °C. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку при помощи ацетона (3 x 0,5
мл) и хроматографируют.
Овощи (картофель, огурцы, томаты). 25 г
пробы измельчают, помещают в плоскодонную колбу, добавляют 2 мл 15-процентного
раствора натра едкого, заливают 30 мл хлороформа и оставляют на 2 часа,
периодически интенсивно встряхивая. Экстракцию повторяют еще дважды хлороформом
по 30 мл. Объединенные экстракты отфильтровывают через фильтр с безводным
сернокислым натрием в круглодонную колбу. Растворитель отгоняют на ротационном
испарителе досуха при температуре 30 °C. К сухому охлажденному остатку
прибавляют 10 мл раствора 1М хлористоводородной кислоты, тщательно ополаскивают
колбу и переносят через фильтр в делительную воронку. Колбу еще дважды (по 5
мл) промывают раствором хлористоводородной кислоты и сливают в ту же
делительную воронку. Объединенный экстракт нейтрализуют раствором натра едкого,
затем добавляют еще 2 мл 15-процентного раствора натра едкого (pH раствора 11) и экстрагируют хлороформом. Далее поступают
аналогично анализу воды.
2.5.2. Условия хроматографирования
Хроматографирование проводят в
системе бутиловый
спирт -
муравьиная кислота - вода в соотношении
7:3:1. После
хроматографирования
пластинку высушивают и
выдерживают под
ртутно-кварцевой лампой
в течение 25 минут на расстоянии 15 - 20
см. Затем
пластинку опрыскивают раствором
бромкрезолового
пурпурного. При этом пластинка окрашивается в фиолетовый
цвет без
видимых зон
локализации соединений. Затем пластинку оставляют на
воздухе на 2 - 3
мин., фон пластинки
становится желтым, а зоны
локализации
соединений проявляются в виде серых пятен. Далее пятна
закрепляют на
пластинке путем обработки 15%
раствором натра
едкого. Ивин и 2,6-лутидин при этом проявляются в
виде фиолетовых
пятен на сером
фоне с величиной R 0,60 и 0,25
соответственно.
f
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественная оценка проводится путем
сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартных растворов.
Содержание ивина и 2,6-лутидина в пробе
определяют по следующей формуле:
A x S
2
X = ------,
P x S
1
где:
X - содержание соединений в пробе, мг/кг (л);
A - количество соединений в пятне стандартного
раствора, мкг
(в диапазоне
линейности);
S -
площадь стандартного раствора, кв. мм;
1
S -
площадь пятна пробы, кв. мм;
2
P - количество анализируемой пробы, мл (г).
3. Требования
техники безопасности
Соблюдать все необходимые требования
безопасности при работе в химических лабораториях, а также правила устройства,
техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима
и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах
санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР (N 2455-81 от
20.10.81).