Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6093-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПИРЕТРОИДОВ (ПЕРМЕТРИНА,
ЦИПЕРМЕТРИНА,
ФЕНВАЛЕРАТА И ДЕКАМЕТРИНА) В МОЛОКЕ И МЯСЕ
ЖИВОТНЫХ
МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
(Дополнение N 2473-81 от 22 октября 1981 г.)
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика пестицидов
1.1. Перметрин
(анометрин Н, амбуш, стомозан, мухотоксин, персан, корсар, пермасект) -
3-феноксибензил-(1RS)-цис,транс-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат.
//\ //\
Cl H
H
// \ // \
\C=C───┴────┴──
C-O-CH -│ ││-O-│ ││
/ │ \
/ ││ 2 \\
/ \\ /
Cl H
\/ O \\/
\\/
CH /\CH
3 3
Эмпирическая формула C H Cl O .
21 20 2 3
М.м. 391,28.
В
чистом виде в зависимости от
соотношения изомеров - вязкая
жидкость, воскообразная
масса или кристаллы со слабым
запахом и
температурой плавления 34 - 39 °C. Температура кипения 200
°C при
0,01 мм
рт. ст. (1,3 Па) и 220 °C при
6,05 мм рт. ст., давление
-7
паров -
3,7 - 4,5
х 10 мм,
летучесть - 0,007 мг/куб. м,
показатель преломления - ПД - 1,5627, плотность - 1,190 - 1,272
25
г/куб. см при 20 °C. Растворимость в воде - 1 - 10 мг/л, гексане и
этиленгликоле - до 30 г/л. Хорошо растворим в метаноле,
этаноле,
циклогексане,
ацетоне, хлороформе, диэтиловом эфире.
Быстрее
гидролизуется в щелочной и сильнокислой среде.
ЛД
в зависимости от препаративной формы - 450 - 4000
мг/кг,
50
ОБУВ в воздухе
рабочей зоны - 3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе -
0,002 мг/куб.
м, в воде
водоемов - 0,05 мг/л. Нормативы МДУ в
продуктах питания находятся в стадии утверждения.
1.2.
Циперметрин (цинометрин, фендона, цимбуш, альфаметрин,
эктомин, ренигейд, беррикейд, фастак) - 3-фенокси-(R,S)-2-
цианобензил-(1R,S)-цис,транс-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметилцикло-
пропанкарбоксилат.
Cl\ H
H
C=C──┴────┴───
C --O--CH-- // \ --O-- // \
Cl/ │
\ / ││ │
│ ││ │
││
H
\/ O CN
\\ / \\ /
/\
CH
CH
3 3
Эмпирическая формула C H O NCl .
22 19 3 2
М.м. 416,30.
Чистое
вещество в зависимости
от соотношения изомеров -
вязкая жидкость, воскообразная масса
или кристаллы. Температура
плавления 1R цис S + 1S цис R изомеров - 80,5
°C. Давление паров
-6 -9
1,29 х
10 - 1,3 х
10 мм рт. ст. при 20 °C. Плотность 1,12
г/куб. см при
20 °C. Растворимость в воде - 0,5
- 1, гексане -
142, ксилоле
- 315 мг/л.
Хорошо растворим в низкомолекулярных
кетонах,
спиртах, хлорсодержащих углеводах.
Гидролизуется
в
щелочной среде.
ЛД
в зависимости от препаративной формы 79 - 5000 мг/кг.
50
ОБУВ в воздухе
рабочей зоны - 0,3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе
- 0,0005 мг/куб.
м, в воде водоемов - 0,03 мг/л.
Нормативы
МДУ в продуктах
питания находятся в
стадии
утверждения.
1.3.
Фенвалерат
(сумицидин,
бельмарк,
OM S-200) -
3-фенокси-(R,S)-цианобензил-(R,S)-2-(4-хлорфенил)-3-метилбутират.
--- --- ---
Cl_//
\\___CH__C __O__CH__//
\\__O__// \\
\ ___ /
/ ││ ││ \ ___ /
\ ___ /
---
CH O CN
--- ---
/\
CH CH
3 3
Эмпирическая формула C H O NCl.
25 22 3
М.м. 419,91.
Кристаллы
с температурой плавления 23 °C. Давление паров -
-7
2,3 х
10 мм рт. ст. В воде не
растворим. Растворим в гексане.
Хорошо растворим
в ацетоне, ксилоле
и низкомолекулярных
одноатомных спиртах. Гидролизуется в щелочной
среде.
ЛД
при оральном введении для крыс 451 мг/кг, ОБУВ в воздухе
50
рабочей зоны -
0,3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе
- 0,0003 мг/
куб. м, в воде
водоемов - 0,03 мг/л.
1.4.
Декаметрин
(дельтаметрин,
децис,
к-отрин,
бутокс)
-
3-фенокси-(S)-а-цианобензил-(1R,3R)-цис,-3-(2,2-дибромвинил)-2,2-
диметилциклопропанкарбоксилат.
CH CH
3\/ 3
Br H
/\ O
\ │ /
\ ││ / \\ // \
C=C──┬───────┬──C
-O-CH- ││ │──O──│ ││
/
H H │ \ //
\\ /
Br CN
Эмпирическая формула C H O Br .
22 19 3 2
М.м. 505,21.
Белое кристаллическое вещество без запаха
с температурой плавления 98 - 101 °C. Давление паров 1,5 х 10-8 мм рт. ст. при
25 °C. В воде не растворим, в этаноле - 16, ксилоле - 250, этилацетате - 350 и
ацетоне - 500 г/л. Термически устойчив. Гидролизуется
в щелочной среде.
ЛД
- 67 мг/кг. ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,1 мг/куб. м,
50
в атмосферном
воздухе - 0,0001 мг/куб. м, в воде
водоемов - 0,005
мг/л.
2. Методика
определения пиретроидов
методом газожидкостной хроматографии в молоке и
мясе
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении пиретроидов из молока и мяса ацетоном или его 85-процентным
раствором с последующей переэкстракцией
в смесь гексана с диэтиловым
эфиром и концентрировании экстракта. Идентификация (по временам удерживания) и
количественное определение (по сумме изомеров) осуществляются на газовом
хроматографе с детектором по захвату электронов. Специальную очистку экстрактов
в системе гексан - ацетонитрил
проводят при значительном содержании жира в пробах, а адсорбционно-хроматографическую на колонке с силикагелем при повышенном
загрязнении проб фоновыми хлорорганическими соединениями и продуктами их
трансформации.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Минимально детектируемое количество: перметрина - 0,5; циперметрина -
0,2; фенвалерата - 0,5; декаметрина
- 0,5 нг.
Нижний предел определения в молоке и
мясе: перметрина - 0,01; циперметрина
- 0,005; фенвалерата - 0,01; декаметрина
- 0,01 мг/кг/л.
Доверительные интервалы среднего значения
при p = 0,95 и n = 6:
а) в молоке для перметрина
- 58 +/- 9,8, циперметрина - 8,1 +/- 9,8; фенвалерата - 78 +/- 10,5 и декаметрина
- 74 +/- 10,4%;
б) в мясе для перметрина
- 53 +/- 10,8; циперметрина - 76 +/- 10,8; фенвалерата - 78 +/- 11,0 и декаметрина
- 72 +/- 11,7%.
2.1.3. Избирательность метода
Фосфор- и хлорорганические пестициды не
мешают определению.
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон ч, ГОСТ
2603-79.
н-Гексан хч, ТУ 6-09-3375-78.
Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-87.
Диэтиловый эфир хч, ГОСТ 6265-79.
Натрий сернокислый безводный, ГОСТ
4166-76.
Бутиловый эфир уксусной кислоты ч, ГОСТ 22300-76.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Насадка 30% OV-17 на инертоне-супер
(0,125 - 0,160 мм) (ЧССР).
Силикагель, 0,1 - 0,4 мм (ЧССР).
Этиловый спирт - ректификат, ГОСТ
5962-67.
Раствор ацетона 85% водный.
Смесь гексана с
диэтиловым эфиром в объемном соотношении 1:1.
Стандартный раствор пиретроидов
в гексане с содержанием 1 нг
в 1 мкл (срок хранения 1 год при герметичной
упаковке).
2.3. Приборы и
посуда
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ
64-11081-83.
Фарфоровые выпарительные чашки, ГОСТ
9147-80, на 25 и 100 мл.
Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, на
100 и 250 мл.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Воронки химические, ГОСТ 25336-82, ТУ
25-11-917-76.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М,
ТУ 25-11-917-76.
Газовый хроматограф с детектором по
захвату электронов - тип "Цвет", "Газохром"
и др.
Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 300
мл.
Микрошприц МШ-10М, ТУ 2.833.106.
Воронка фильтрующая ЕФ-1-20-ПОР-100, ГОСТ 25336-82.
Пипетки на 1 мл, ГОСТ 20292-74.
Мясорубка хозяйственная.
Холодильник бытовой.
Центрифуга типа ЦЛР-1.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Подготовка газохроматографической
колонки
Стеклянную колонку длиной 500 мм с
внутренним диаметром 3 мм заполняют одним из принятых способов готовой набивкой
инертон-супер с 3% OV-17. Колонку кондиционируют при
260 °C, продувая газ-носитель со скоростью 60 мл/мин. в течение 8 часов.
2.4.2. Отбор и подготовка проб
Отбор проб производят в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции,
продуктах питания и объектах окружающей среды" (N 2051-79, утверждены
Минздравом СССР 21.08.79).
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция
Молоко. В колбу с притертой пробкой
объемом не менее 300 мл заливают 50 мл молока анализируемой пробы и 150 мл
ацетона. Содержимое интенсивно перемешивают, встряхивая колбу не менее 5 минут,
и помещают в холодильник при температуре 0 - +3 °C на 6 - 24 часа. Затем
нерастворенные компоненты молока отделяют от ацетонового раствора
центрифугированием или фильтрованием. Осадок размельчают с помощью размельчителя тканей или шпателем в 25 мл 85-процентного
ацетона и переносят в колбу, использованную для первоначальной экстракции. В
эту же колбу приливают еще 75 мл 85-процентного ацетона, которым предварительно
обмывают оборудование, примененное для размельчения осадка. Колбу с содержимым
встряхивают в течение 10 минут и помещают в холодильник на 2 часа. Ацетоновый раствор
отделяют от нерастворенных компонентов фильтрованием или центрифугированием.
Ацетоновые экстракты объединяют, добавляют 10 мл бутилового эфира уксусной
кислоты и испаряют ацетон из экстракта на ротационном вакуумном испарителе при
температуре не выше 40 °C. Отгонку после испарения ацетона сразу же прекращают,
не допуская испарения воды и бутилового эфира уксусной кислоты. Остаток
экстракта переносят в делительную воронку, приливают 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном
(1:1) и экстрагируют пиретроиды, встряхивая воронку в
течение 5 минут. Слоям дают разделиться. При медленном разделении слоев
добавляют при легком встряхивании 5 - 10 мл этилового спирта. Нижний слой
сливают в другую делительную воронку и повторяют экстракцию 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном
(1:1). Гексанэфирную фракцию объединяют, сушат
безводным сульфатом натрия, переносят в выпарительную чашку и испаряют досуха
под тягой в вытяжном шкафу. Экстракт периодически подливают так, чтобы его
количество за все время испарения не превышало одной трети общего объема чашки.
Допускается подогрев экстракта до 30 °C, чем удается предотвратить конденсацию
воды на стенках чашек и ускорить испарение растворителей.
Мясо. Пробы предварительно пропускают
через мясорубку или размельчают ножницами. Отбирают навеску 25 г и
гомогенизируют в 25 мл 85-процентного водного раствора ацетона. К гомогенату приливают еще 50 мл раствора ацетона,
встряхивают или перемешивают в течение 10 минут и помещают в холодильник при
температуре 0 - +3 °C на 6 - 24 часа. Дальнейший ход анализа такой же, как и
при определении пиретроидов в молоке. Сухой остаток
экстрактов из молока или мяса растворяют в 1 мл бутилового эфира уксусной
кислоты. В испаритель вводят 2 - 6 мкл этого
раствора.
Если полученные экстракты оказались
недостаточно чистыми, что получается при значительном содержании жира или
фоновых хлорорганических пестицидов в пробе, и количественное определение пиретроидов затруднено, проводят очистку с ацетонитрилом и (или) на колонке с силикагелем. Для этого
конечные экстракты переносят в выпарительные чашки и испаряют досуха.
2.5.2. Очистка экстракта
Очистка с ацетонитрилом.
К сухому остатку для его набухания приливают 1 мл ацетона и через 2 - 3 минуты
5 мл гексана. Покачивая чашку, тщательно обмывают ее
поверхность и сливают раствор в делительную воронку. Чашку еще раз обмывают 5
мл гексана и сливают раствор в ту же воронку.
Приливают 10 мл ацетонитрила и интенсивно встряхивают
2 минуты. Слоям дают разделиться. Нижний (ацетонитрильный) слой сливают в
другую воронку. А из гексанового раствора экстракцию
повторяют еще дважды, каждый раз применяя по 5 мл ацетонитрила.
К объединенному ацетонитрильному раствору приливают 40 мл дистиллированной воды
и 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном
(1:1). Встряхивают воронку в течение 2 минут. Слоям дают разделиться. Нижний
слой сливают в другую воронку, приливают 30 мл той смеси и экстракцию
повторяют. Гексанэфирный экстракт объединяют, сушат
безводным сульфатом натрия, переносят в выпарительную чашку и испаряют
растворителем досуха.
Очистка на колонке с силикагелем. Очистку
экстракта проводят на специальном устройстве (см. рис. - не приводится). Для
его подготовки пробирку отсоединяют. В воронку засыпают 4,0 - 4,5 куб. см
силикагеля, приливают 5 мл гексана, тщательно
перемешивают содержимое стеклянной глазной палочкой и, включая вакуум,
отсасывают гексан из воронки в колбу. Силикагель
дополнительно промывают 10 мл смеси диэтилового эфира
с гексаном (1:1) порциями по 5 мл и в заключение - 5
мл гексана. После этого колонка готова к работе.
Сухой остаток экстракта смывают с
выпарительной чашки 15 мл гексана порциями по 5 мл.
Каждую порцию смыва (5 мл) сливают в воронку устройства и перемешивают с
силикагелем в течение 3 минут. Не прекращая перемешивания, включают вакуум и
медленно по каплям отсасывают гексан в колбу. Так
поступают с каждой порцией смыва. Силикагель промывают 20 мл гексана порциями по 5 мл. Но в этом случае гексан полностью из колонки не удаляют. Как только мениск гексана достигает верхнего уровня силикагеля, вакуум отключают,
добавляют следующую порцию растворителя, слегка помешивая стеклянной палочкой,
выравнивают слой силикагеля, а затем включают вакуум. Так поступают и с
последней порцией растворителя. Затем с помощью резиновой муфты закрепляют
пробирку, вводя в нее стебель воронки. Пиретроиды элюируют 12 мл смеси диэтилового
эфира с гексаном (1:1), постоянно подливая смесь, и
полностью отсасывают элюат в пробирку. Элюат переносят в выпарительную чашку и испаряют почти
досуха. Остаток растворяют в 1 мл бутилового эфира уксусной кислоты. В
испаритель хроматографа вводят 2 - 6 мкл этого
раствора.
2.5.3. Условия хроматографирования
а)
хроматограф "Цвет-106" с детектором по захвату электронов.
Стеклянная колонка
размером 500 x 2 мм с насадкой инертон-супер
(0,125 -
0,160 мм) с 3% OV-17. Температурные режимы: термостат
колонки -
250, испарителя - 280 и детектора - 270 °C. Скорость
газа-носителя (азота)
- 28 мл/мин., на продувку
детектора - 120
-10
мг/мин. Шкала электрометра - 1 x 10 А. Скорость протяжки ленты
- 200
мм/час. Линейный диапазон
детектирования - 0,2 - 10 нг.
Абсолютное время
удерживания: перметрина - 2,52 мин., циперметрина
- 3,20 мин., фенвалерата - 4,66 мин., декаметрина
- 6,33 мин.
б)
хроматограф
"Цвет-550" с детектором постоянной скорости
рекомбинации. Стеклянная
колонка размером 500 x 3 мм с
насадкой
инертон-супер (0,125 - 0,160 мм) с 3% OV-17. Температурные
режимы:
термостат колонки
- 260, испарителя - 270, детектора - 280 °C.
Скорость
газа-носителя (азота) - 60 мл/мин.
Шкала электрометра -
-9
8 x 10 . Скорость протяжки ленты самописца - 200
мм/час. Диапазон
определяемых концентраций 0,2
- 10 нг. Абсолютное
время
удерживания: перметрина - 2,14, циперметрина -
3,05, фенвалерата -
4,42 и декаметрина - 6,88 мин.
В качестве альтернативной может быть
использована стеклянная колонка размером 500 x 3 мм с насадкой хроматон N-AW-HDMC (0,125 - 0,160 мм) с 5% SE-30.
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественное определение проводят
методом сравнения со стандартом по площади пика анализируемого соединения в
пробе и известном количестве стандарта. Площадь пика находят одним из
общепринятых методов. Содержание пиретроидов в
анализируемом материале (C) в мг/кг (л) находят по формуле:
S
x C x V x 100
р ст
C = ------------------,
S x V x
P x K
ст а
где:
S -
площадь пика анализируемой пробы, кв. мм;
р
S -
площадь пика стандарта, кв. мм;
ст
C -
содержание пиретроидов в стандарте, нг;
ст
V
- объем раствора,
из которого отбирают
аликвоту
для
инъекции, мл;
V -
объем аликвоты, которую
вводят в хроматограф, мкл;
а
P - навеска или объем анализируемого
образца, г или мл;
K - процент определения.
3. Требования
безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
рекомендуемые при работе с легковоспламеняющимися растворителями,
взрывоопасными и высокотоксичными веществами.