Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6101-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СУМИ-АЛЬФА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ
МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Суми-альфа -
S-альфа-циано-3-феноксибензил(S)-2-(4-хлорфенил)-
3-метилбутират. Суми-альфа представляет
собой смесь изомеров,
обогащенную эсфенвалератом. Эсфенвалерат -
оптический изомер
фенвалерата.
Другим основным изомером
суми-альфа
является
(R)-альфа-циано-3-феноксибензил(S)-2-(4-хлорфенил)-3-метилбутират.
Суми-альфа -
жидкость или твердое вещество коричневого цвета, без
специфического запаха.
Т. кип. 225 °C/1,7 мм рт. ст.,
летучесть
-7
при 20 °C
1,44 x 10 мм рт. ст. Почти нерастворим
в воде, менее
1,0 ч./млн.
Растворимость в органических
растворителях при 25 °C,
в % вес/объем:
ксилол -
45,0; хлороформ - 45,0; ацетон - 45,0;
этилацетат -
45,0.
CH
CH C H ClNO .
3 3 25 22 3
\/
CH //\ //\ Мол. масса 419,9.
_____
│ // \
// \
Cl_// \\_CH___COOCH__│ ││-O-│ ││
\ ___ / │ \\
/ \\ /
--- CN
\\/ \\/
Предложен в качестве инсектицида для
борьбы с вредителями
овощных культур, плодовых деревьев.
ЛД для крыс
325 мг/кг (по
50
данным фирмы Сумитомо).
2. Методика
определения суми-альфа
в биологическом материале
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на определении суми-альфа методом газожидкостной хроматографии после
экстракции препарата из анализируемой пробы органическим растворителем и
очистки экстрактов в системе жидкость - жидкость.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода определения суми-альфа (ГЖХ)
┌─────────────┬────────────┬─────────────┬─────────────┬──────────────────┐
│Анализируемый│ Размах
│ Среднее │Относительное│ Доверительный │
│ объект
│варьирования│
значение │ стандартное │интервал
среднего,│
│ │ │ определения │ отклонение │ % │
├─────────────┼────────────┼─────────────┼─────────────┼──────────────────┤
│Кровь │64 - 72 │67,4 │4,99 │+/- 4,95 │
│Печень │59 - 64 │61,4 │4,5 │+/- 4,50 │
│Мозг │58 - 65 │62,0 │4,45 │+/- 4,49 │
│Сальник │66 - 69 │67,2 │2,03 │+/- 3,16 │
└─────────────┴────────────┴─────────────┴─────────────┴──────────────────┘
Диапазон определяемых концентраций 0,05 -
0,5 мг/кг (мг/л).
Предел обнаружения 0,005 мг/кг (мг/л).
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, осч 95,
ТУ 6-09-3513-86.
Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.
Метанол, хч,
ГОСТ 6995-77.
Трихлоруксусная кислота, ТУ 6-09-1926-77,
20%-ный водный раствор.
Сульфат натрия, ч,
ГОСТ 4166-76, 5%-ный водный раствор.
Сульфат натрия безводный, ч, ГОСТ 4166-76.
Хроматон N-AW-HMDS (0,16 - 0,20 мм) с нанесенной неподвижной фазой SE-30 (Хемапол, ЧССР).
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Воздух из баллона или нагнетаемый
компрессором.
Суми-альфа - 96,5%, фирма "Сумитомо".
Основной рабочий стандартный раствор суми-альфа, содержащий 100 мкг/мл суми-альфа,
готовят следующим образом: растворяют 10,36 мг суми-альфа
(96,5%) в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Стандартный рабочий раствор,
содержащий 1 мкг/мл суми-альфа, получают
соответствующим разбавлением основного рабочего раствора. Хранят в холодильнике
не более 5-ти месяцев.
Уксусная кислота, хч,
ГОСТ 61-69.
2.3. Приборы и
посуда
Газовый хроматограф с детектором по
захвату электронов (тип "Цвет-106" или др.).
Ротационный вакуумный испаритель для
отгонки растворителей типа ИР-11, ТУ 25-11-917-76.
Микрошприцы МШ-10М, 10 мкл, ТУ 2-833-106.
Микроизмельчитель тканей, тип РТ-2, ТУ 64-1-1505-79.
Аппарат для встряхивания, ТУ
25-11-917-79, или аналогичный.
Центрифуга с числом оборотов до 6000 в
мин.
Центрифуга ОПН-3442, ТУ 5-375-4260-76.
Посуда мерная, ГОСТ 1770-74.
Воронки делительные емкостью 200, 500 мл,
ГОСТ 25336-82.
Колбы конические емкостью на 100, 300 мл,
ГОСТ 25336-82.
Колбы грушевидные для отгонки
растворителей, ГОСТ 25336-82.
Воронки конические, ГОСТ 25336-82.
Воронки Бюхнера,
ГОСТ 25336-82.
Колба Бунзена, ГОСТ 25336-82.
Секундомер СД СПР 1.200, ГОСТ 5072-79.
2.4. Отбор,
хранение и доставка проб
2.4.1. Пробы (кровь, печень, мозг,
сальник, моча) отбирают в лабораторных условиях и сразу же помещают их в
испарительную камеру холодильника. Хранят на льду не более 3 суток.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов
Биологический материал. Пробу
биоматериала (кровь, печень, мозг, сальник, моча), предварительно измельченную
ножницами, переносят в сосуд для гомогенизации и заливают 50 мл метанола или 50
мл смеси ацетон:вода (4:1).
Биоматериал измельчают на микроизмельчителе тканей в
течение 3 - 5 мин. при 3000 об./мин.
Гомогенизированную пробу помещают в коническую колбу на 100 мл и экстрагируют
на аппарате для встряхивания в течение 1 часа (дважды по 30 мин.). Объединенный
экстракт фильтруют через воронку Бюхнера. Фильтрат
обрабатывают 20%-ным раствором трихлоруксусной
кислоты или уксусной кислотой по 1 мл на каждый грамм ткани или мл крови и 10
мл воды и смесь помещают в испарительную камеру холодильника на 1 час. Затем к
охлажденной смеси прибавляют по 10 - 15 мл 5%-ного
водного раствора сульфата натрия и центрифугируют при 4000 - 5000 об./мин. в течение 10 - 15 мин. или
фильтруют через воронку Бюхнера в вакууме
водоструйного насоса. Центрифугат экстрагируют гексаном (3 x 20 мл). Объединенные гексановые
экстракты промывают дистиллированной водой, сушат безводным сульфатом натрия и
упаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе. Последние порции
растворителя удаляют при помощи сжатого воздуха. Остаток в колбе растворяют в 1
мл ацетона, выдерживают в холодильнике 2 - 3 часа и затем центрифугируют при
2000 об./мин. в течение 15
мин. Полученный указанным способом центрифугат
анализируют на газожидкостном хроматографе.
2.5.2. Идентификация и количественное
определение суми-альфа.
2.5.3. Метод газожидкостной хроматографии
Носитель - хроматон
N-AW-HMDS.
Неподвижная фаза - 5% SE-30.
Колонка стеклянная 0,5 м x 3 мм.
Скорость газа-носителя (азота) 60 куб.
см/мин. ("Цвет-106").
Скорость азота для продувки детектора 150
мл/мин.
-12
Шкала электрометра 20 x 10 А.
Температура колонки 220 °C.
Температура испарителя 240 °C.
Вводимый объем 2 мкл.
Линейный диапазон детектирования 0,5 - 50
нг.
Минимально детектируемое количество 0,5 нг.
Время удерживания при указанных условиях
10,8 мин.
Количественное определение проводят
методом соотношения со стандартом путем сравнения рассчитываемого пика с пиком,
полученным введением известного количества стандартного вещества, при условии,
что величина пиков находится в диапазоне линейности детектора. Содержание суми-альфа в анализируемой пробе определяют по формуле:
C x V x
H x V
1 1
2
X = ----------------,
H x V x
P
1 2
где:
X - содержание суми-альфа
в пробе, мкг/г, мкг/мл;
C - концентрация стандартного раствора,
мкг/мл;
H -
высота пика стандартного раствора, мм;
1
H -
высота пика пробы, мм;
2
V -
объем
стандартного раствора, введенный
в хроматограф,
1
мкл;
V -
объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
2
V - общий объем экстракта после упаривания,
мл;
P - навеска анализируемой пробы, г.
3. Техника
безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила
безопасности при работе с органическими и токсическими веществами.