Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6102-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХАРЭЛЛИ В ВОДЕ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ
В ТОНКОМ СЛОЕ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Харэлли - смесь препаратов "хардин"
(12,5% по мочевине) и "эллипс" (11,69% по мочевине) в соотношении 2:1
(весовые).
Действующее вещество хардина
- комплекс диэтилэтаноламина и
N-(2-хлор-бензол-сульфонил)-N-(6-метокси-4-метил-1,3,5-триазин-2-ил)мочевины (хлорсульфурона).
Структурная формула:
┌─ ─┐ CH CH OH
│ CH │
2 2
│ Cl 3 │
/
│
_____/ N_____/ │ /
│ //
\\_SO NHCONH_// \\__N │N___C H
│ \ ___ / 2
\ ___ / │ \ 2 5
│
--- N --- \ │
\
│ OCH │
C H
│ 3 │ 2 5
└─ ─┘
Эмпирическая формула: C H ClN O SC H NO.
12 12 5 4 6
15
Молекулярная масса: 474,5.
Хардин - препарат, представляющий собой раствор действующего вещества в
смеси вода - триэтиленгликоль (1:1, вес %) с добавкой
0,4% ОП-10. Содержание комплекса в растворе 16,5 +/- 0,5% (вес.). Плотность препарата при 20° 1115 - 1125 мг/куб. м, Т. кип. - 100
°C, хорошо растворим в воде, в полярных растворителях коагулируется, с
неполярными не смешивается, нелетуч, в водных
растворах устойчив в течение года, при разбавлении водой на свету при pH 5 - 7 и 20 °C разлагается.
ОБУВ в воздухе - 5 мг/куб. м.
Хлорсульфурон - белое кристаллическое вещество.
Эмпирическая формула C H ClN O S.
12 12 5 4
Молекулярная масса 357,78. Т. пл. 174 -
178 °C. Растворимость в толуоле - 0,3%, метаноле - 1,8%, ацетоне - 7,0%.
Препарат выпускается в виде аминных солей (диметиламинная, изопропиламинная, моноэтаноламинная).
Степень чистоты - 96 - 98%.
Действующее вещество эллипса -
N-(о-хлорфенилсульфонил)-N-(4-диметиламино-6-(а-метил)-пропилидениминоокси-1,3,5-триазин-2-ил)мочевина.
Структурная формула:
Cl N(CH )
_____/ N_____ 3 2 C H
ClN O .
// \\_SO NHCONH_// \\N 16 22 7 4
\ ___ / 2 \ ___ / CH
--- N --- \ / 3 М.м. 441,5.
O _N=C
2 \
C H
2 5
Синонимы: эллипс, хлорсульфоксиметил.
Химически чистое соединение - белое кристаллическое вещество, твердое, без
запаха. Т. пл. - 173 °C. Плохо растворим в воде, этиловом спирте, ацетоне,
хлороформе, хорошо - в диметилсульфоксиде. Степень
чистоты - 96,67%.
Препарат "харэлли"
представляет собой светло-желтую прозрачную жидкость со слабым аммиачным
запахом, плотность - 1,14 г/куб. см, растворим в воде.
ДОК, ПДК, МДУ харэлли
в настоящее время не установлены.
2. Методика
определения
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении хардина и эллипса (действующие вещества пестицида "харэлли") из подкисленной пробы воды хлороформом,
концентрировании экстракта и хроматографировании его аликвоты в тонком слое пластин "Силуфол".
В качестве подвижной фазы могут быть использованы: бензол - ацетон в
соотношении 4:1 (об./об.); гексан - ацетон в соотношении 1:1 (об./об.).
Для обнаружения зон локализации
препаратов на хроматограммах используют смесь
растворов бромфенолового синего и азотнокислого
серебра с последующей обработкой хроматограмм
лимонной (или уксусной) кислотой. Количественное определение препаратов
проводят сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандарта.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Диапазон определяемых концентраций 0,005
- 0,602 мг/л.
Предел обнаружения - 0,5 мкг.
Размах варьирования: хардин
- 80,0 - 100,0%,
эллипс - 80,0 -
100,0%.
Среднее значение определения стандартных
количеств:
хардин
- 90%,
эллипс - 92%.
Стандартное отклонение среднего:
хардин
- 0,6,
эллипс - 0,8.
Относительное стандартное отклонение
среднего:
хардин
- 0,05,
эллипс - 0,05.
2.1.3. Избирательность метода
Метод специфичен: другие соединения этого
класса (круг, грамекс) в указанных условиях хроматографирования определению не мешают.
2.2. Реактивы и
материалы
Хардин (хлорсульфурон), крист.
(ВНИИХСЗР) 96 - 98%.
Эллипс (ВНИИХСЗР) 96,67%.
Хлороформ, хч,
ГОСТ 20015-74.
Ацетон, чда,
ГОСТ 2603-79.
Бензол, хч,
ГОСТ 5955-81.
Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Этиловый спирт, 96-процентный, ТУ
6-09-1910-77.
Кислота хлористоводородная, ч, ГОСТ 3118-77, водный раствор (1:1).
Кислота уксусная, хч,
ГОСТ 18290-72, 5-процентный водный раствор.
Кислота лимонная, хч,
ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор.
Аммиак водный, чда,
ГОСТ 3760-79.
Серебро азотнокислое, чда,
ГОСТ 1277-81.
Бромфеноловый синий, чда, ТУ
6-09-3710-83.
Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76.
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.
Пластинки "Силуфол"
(Kavalier, ЧССР).
Вата гигроскопическая.
2.3. Приборы,
посуда
Весы аналитические ВЛА-200М.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ
25-11-917-76.
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.
Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ
10396-75.
Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82,
вместимостью 50 - 100 мл.
Колбы мерные, цилиндры, мензурки,
пробирки, ГОСТ 1770-74.
Колбы конические плоскодонные, ГОСТ
25336-82.
Воронки химические, диаметр 56 мм, ГОСТ
25336-82.
Воронки делительные, ГОСТ 25336-82,
вместимостью 250 мл, 1 л.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1; 5; 10 мл.
Микропипетки, ГОСТ 20292-82, на 0,1; 0,2
мл.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.
Скальпель.
Камера для хроматографирования,
ГОСТ 25336-82.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Приготовление стандартного,
рабочих растворов хардина, эллипса
Стандартные растворы пестицидов
концентрации 100 мкг/мл готовят растворением соответствующей навески препарата
в ацетоне (или этиловом спирте) в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в
холодильнике. Годен к употреблению в течение 30 дней.
Рабочие растворы пестицидов концентраций
2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл готовят в градуированных пробирках вместимостью 10
мл соответствующим разбавлением ацетоном стандартных растворов. Хранят рабочие
растворы хардина, эллипса в холодильнике. Годны к употреблению в течение 3 - 5 дней.
2.4.2. Проявляющий реактив - бромфеноловый реагент
Смесь растворов бромфенолового
синего (БФС) и азотнокислого серебра. Готовят два раствора: 1. 0,5%
водно-ацетоновый раствор азотнокислого серебра. 2. 10 мл 0,05-процентного раствора
бромфенолового синего в ацетоне. Раствор 2 разбавляют
раствором 1 до объема 100 мл. Хранят проявляющий реактив в темном прохладном
месте. Годен к употреблению в течение 3 - 5 дней.
После обработки хроматограмм бромфеноловым
реагентом осветляют фон обработкой пластин 2-процентным водным раствором
лимонной кислоты или 5-процентным водным раствором уксусной кислоты.
2.4.3. Подготовка пластин "Силуфол"
Пластинку "Силуфол"
помещают в хроматографическую камеру, содержащую
смесь растворителей ацетон - 25-процентный аммиак в соотношении 7:3(об./об.). Глубина погружения
пластинки в растворитель составляет 0,5 см. После подъема фронта растворителя
до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до
испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению. Хранят
подготовленные пластинки в эксикаторе.
2.5. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (МЗ СССР, ГСЗУ, Москва,
1980, N 2061-79 от 21.08.1979). Отобранные пробы хранить в стеклянной таре в
защищенном от света месте не более 1 - 3 суток.
2.6. Проведение
определения
2.6.1. Экстракция и очистка
На одно определение берут из
анализируемого образца две пробы воды по 500 мл.
500 мл воды
помещают в делительную воронку вместимостью 1 л, подкисляют до pH 2 разбавленной (1:1) дистиллированной водой -
хлористоводородной кислотой (берут около 1 мл раствора кислоты) и экстрагируют
препарат дважды свежими 10 - 15 мл хлороформа, каждый раз встряхивая содержимое
воронки в течение 2 - 3 мин. Экстракты двух проб объединяют (получают по 40 -
60 мл) в делительной воронке вместимостью 250 мл, промывают 10 - 15 мл дистиллированной воды, подкисленной до pH 6 разбавленной хлористоводородной кислотой, и фильтруют
через слой (около 7 - 10 г) безводного сульфата натрия в химической воронке в
грушевидную колбу. Растворитель отгоняют до объема около 1 мл на ротационном
испарителе при температуре 55 - 60 °C. Остаток растворителя удаляют продуванием
воздуха.
2.6.2. Хроматографирование
Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл
ацетона (или этанола), закрывают колбу герметично пробкой, перемешивают
содержимое и 0,2 мл полученного раствора наносят микропипеткой на
подготовленную пластинку "Силуфол". Рядом с
пробой наносят по 0,2 мл каждого рабочего раствора пестицида, что соответствует
содержанию в пятне 0,5; 1,0; 2,0; 4,0 мкг каждого препарата (растворы хардина и эллипса одинаковой концентрации наносят в одну
точку).
Пластинку
помещают в хроматографическую
камеру, куда за 10 -
15 минут
до хроматографирования наливают
один из подвижных
растворителей, указанных
в таблице, в
таком количестве, чтобы
глубина погружения
пластинки в растворитель
составила 0,5 см.
После подъема фронта растворителя от линии старта
на высоту 10 см
хроматографирование
прекращают. Пластинку выдерживают
в вытяжном
шкафу до
испарения растворителей и
обрабатывают бромфеноловым
реагентом, затем
раствором лимонной (или
уксусной) кислоты. О
наличии харэлли
свидетельствует проявление на хроматограмме
серо-синего пятна хардина либо
пятен хардина и
эллипса (в
зависимости от
содержания харэлли в пробе). Величины R хардина,
f
эллипса приведены в таблице.
Таблица
ВЕЛИЧИНЫ R
ПРОИЗВОДНЫХ МОЧЕВИНЫ НА ПЛАСТИНКАХ "СИЛУФОЛ"
f
┌──────────────────┬─────────────────────────────────────────────┐
│ Соединение │ Подвижный растворитель │
│ ├──────────────────────┬──────────────────────┤
│ │бензол - ацетон (4:1) │гексан - ацетон (1:1) │
├──────────────────┼──────────────────────┼──────────────────────┤
│Круг │0,37 │0,53 │
│Эллипс │0,43 │0,63 │
│Хардин │0,33 │0,35 │
│Грамекс │0,28 │0,41 │
└──────────────────┴──────────────────────┴──────────────────────┘
2.7. Обработка
результатов анализа
Количественная оценка хардина,
эллипса, являющихся действующими веществами харэлли,
проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен пробы и
рабочих растворов пестицидов.
Содержание каждого пестицида в
анализируемой пробе рассчитывают по формуле:
A x V
X = ------,
V x P
1
где:
X - содержание хардина, эллипса в
исследуемой пробе, мг/л;
A -
количество хардина, эллипса, найденное путем
сравнения со
стандартами,
мкг;
V - объем пробы, мл;
V
- объем аликвоты,
отобранной для хроматографирования,
мл,
1
при нанесении
всей пробы V = V ;
1
P - объем исследуемой пробы, мл.
3. Требования
безопасности
Соблюдать все необходимые требования
безопасности при работе в химических лабораториях.