Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6106-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГЛУФОСИНАТ АММОНИЯ (БАСТА) В ВОДЕ И
РАСТИТЕЛЬНЫХ КУЛЬТУРАХ МЕТОДОМ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика
Глуфосинат аммоний (баста), XOE 039866-DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфонат аммония (по номенклатуре ИЮПАК).
O
│ - +
CH P-CH -CH -CH-COOH/ NH C H N O P.
3 2 2 │ 4 5 15 2 4
\\
NH
O 2 М.м. 198,19.
Белое кристаллическое вещество,
температура плавления 215 °C.
Растворим в воде, нерастворим
в органических растворителях. ОДУ в воде водоемов 0,02 мг/л.
Гербицид для борьбы с широким спектром
одно- и многолетних двудольных и злаковых сорняков в овощеводстве,
виноградарстве, садоводстве.
2. Методика
определения глуфосината аммония (баста)
в воде
и растительных культурах
<*>
--------------------------------
<*> Примечание: методика
разрабатывалась на яблоках различных сортов, кожуре цитрусовых, травянистой растительности,
хвое, зерне, картофеле; при определении в других культурах необходимо
предварительно провести анализ контрольной пробы исследуемого продукта.
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на концентрировании водного
экстракта, очистке и выделении глуфосината аммония на
колонке с полисорбом и определении препарата из аликвоты подготовленного экстракта хроматографией на
пластинках "Силуфол" с обнаружением басты по реакции с нингидрином.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Минимально детектируемое количество - 0,1
мкг.
Нижний предел определения:
вода - 0,025 мг/л
растения:
овощи, фрукты - 0,1 мг/кг
зерно - 0,2 мг/кг
зеленая масса (травянистая
растительность, хвоя) - 0,5 мг/кг
Размах варьирования, %:
вода - 70 - 102
растения - 66 - 105
Среднее значение определения, %:
вода - 87
растения - 83
Стандартное отклонение,
%:
вода - 5,6
растения - 6,4
Доверительный интервал среднего при p =
0,95, n = 5:
вода +/- 15,6
растения +/- 18
Поправочный коэффициент, учитывающий
потери при концентрировании вымораживанием до 2 - 3 мл, равен 1,2.
2.1.3. Избирательность метода
Определению не мешают другие ФОП, в том
числе водорастворимые, глифосат фосфамид.
Определению могут мешать водорастворимые коэкстрактивные
вещества, содержащие аминогруппу. В связи с этим проводится ТСХ-анализ
контрольного образца исследуемой культуры, как описано ниже (п. 2.5.1).
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, хч,
ГОСТ 2603-79.
н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Полисорб С-60/100, ТУ 6-05-211-1313-86.
Метанол, хч,
ГОСТ 6995-77.
Аммиак водный, 25%, ч, ГОСТ 3760-79.
Этилацетат, хч,
ГОСТ 22300-81.
Этанол 96%, ГОСТ 5962-81.
Медь сернокислая, чда,
ГОСТ 19347-84, прокаленная при t = 160 °C до светло-голубого цвета.
Натрия хлорид, ч,
ГОСТ 4233-77.
Диэтиловый эфир медицинский, ГОСТ 6265-74.
Вата обезжиренная (промытая эфиром).
Бинт или марля.
Глуфосинат аммоний с содержанием основного вещества не менее 99%.
Основной стандартный раствор (ОСР) глуфосината аммония: 100 мг вещества растворяют в 100 мл
1-процентного водного раствора аммиака. Раствор хранить в холодильнике не более
3-х месяцев.
Рабочие стандартные растворы 1 - 100, 2 -
10 мкг/мл, 3 - 1 мкг/мл готовят разведением ОСР 1-процентным раствором аммиака.
Растворы хранить в холодильнике не более
2-х недель.
Проявляющий реагент: 2-процентный раствор
нингидрина в ацетоне. Хранить в темной склянке.
2.3. Приборы и
посуда
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ
64-11081-83.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М с
набором колб, ТУ 25-11-917-74.
Вакуумный водоструйный насос.
Колба Бунзена емк. 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Воронка Бюхнера,
d = 75 мм, ГОСТ 9147-80.
Электроплитка с закрытой спиралью.
Холодильник бытовой с морозильной
камерой.
Колбы конические, 250, 50 мл, ГОСТ
25336-82.
Колбы мерные, 100, 50 мл, ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные,50,100 мл, ГОСТ 1770-74.
Пробирки мерные, 10 мл, ГОСТ 1770-74.
Выпарительные чашки 40 - 50 мл, ГОСТ
9147-80.
Колонки хроматографические,
альфа = 18 мм, высота 20 см.
Пипетки на 1 - 10 мл, ГОСТ 1770-74.
Микропипетки на 0,1; 0,2 мл, ГОСТ
1770-74, или дозаторы пипеточные на 0,1; 0,2 мл, III, ТУ 84-1-3329-81, или
шприц на 1 мл.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции,
продуктах питания и объектах окружающей среды", утвержденными заместителем
Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, N 2051-79.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция глуфосината
аммония из воды и растений
Вода. 200 мл анализируемой пробы помещают в
круглодонную колбу
емкостью 500
мл. Присоединяют колбу к ротационному испарителю,
помещают ее в
баню с мелко раздробленным льдом с солью (10:3) <*>.
Вращают колбу
на ротационном испарителе (без включения вакуума),
чтобы вода
в колбе начала
кристаллизоваться. Кристаллизацию
проводят до
тех пор, пока в
колбе не останется ~= 20 мл воды.
Оставшуюся воду переносят в отгонную колбу емкостью 50 -
100 мл и
продолжают кристаллизацию до тех пор, пока в колбе не
останется 2
- 3
мл. Быстро сливают
воду в мерную
пробирку (V ). Либо
1
оставшуюся воду
(~= 20 мл)
сливают в выпарительную
чашку и
упаривают на
кипящей водяной бане до объема ~= 2 мл. (Осторожно!
Не
выпаривать досуха, чашку
периодически ополаскивают водой,
оставшейся в чашке.)
Переносят оставшуюся воду в мерную пробирку.
Измеряют объем
(V ). Отбирают 1 мл пробы, прибавляют к нему 1
мл
1
этанола и 1 мл
(1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают,
дают отстояться
и аликвоту 0,1
- 0,3 мл
наносят на
хроматографическую пластинку.
--------------------------------
<*> Примечание: приготовленную
смесь лед с солью можно повторно заморозить в холодильнике, чтобы использовать
в дальнейшем.
Растительные продукты. Овощи,
фрукты, траву измельчают до 0,5 - 1 см, зерно до 2 - 3 мм (отсеивают от муки) и
отбирают среднюю пробу: овощи, фрукты - 100 г, трава - 20 г, зерно - 50 г.
Пробу помещают в плоскодонную колбу и заливают точно измеренным объемом воды:
овощи, фрукты - 150 мл, траву, зерно - 100 мл. Встряхивают пробу в
течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Отбирают часть экстракта (овощи,
фрукты - 80 - 90 мл, зерно, трава - 60 - 70 мл), фильтруя его под вакуумом
водоструйного насоса в колбу Бунзена через двойной слой марли, вложенной в
воронку Бюхнера. Из колбы Бунзена отбирают в цилиндр
точно половину прибавленного к исследуемому образцу объема воды: овощи, фрукты
- 75 мл (соответствует массе "P" - 50 г), трава, зерно - 50 мл (масса
10 и 25 г соответственно). Измеренный водный экстракт переносят в делительную
воронку и промывают этилацетатом 2 x 30 мл; этилацетат (верхний слой)
отбрасывают. Водный экстракт переносят в колбу для отгонки растворителей
емкостью 100 - 150 мл и концентрируют вымораживанием до 2 - 3 мл, как описано для
воды. Далее проводят очистку образца на колонке, как описано ниже.
Одновременно с анализируемым образцом
подготавливают экстракт аналогичного контрольного образца.
Очистку экстрактов проводят на колонке с полисорбом.
Подготовка колонки. Колонку присоединяют
к колбе Бунзена, соединенной с водоструйным насосом. В колонку помещают тампон
из обезжиренной ваты, насыпают 15 куб. см полисорба,
наливают 10 мл ацетона и включают водоструйный насос. Затем на слой полисорба помещают ватный тампон и промывают слой еще 40 мл
ацетона при легком просасывании водоструйным насосом, чтобы полностью удалить
ацетон. Затем насос отключают.
К
подготовленному, как описано выше, экстракту (2 - 3
мл)
прибавляют 50
мл ацетона и
хорошо перемешивают. Пропускают
полученный ацетоновый
раствор через колонку
под вакуумом
водоструйного насоса, промывают
колонку 20 мл
ацетона (под
вакуумом), затем
20 мл смеси ацетон - вода 9:1 (под вакуумом) и
весь элюат
отбрасывают. Колбу отключают
от вакуума, пропускают
через
колонку 15 мл
воды при прокапывании без отсоса. Когда над
слоем сорбента
останется ~ 0,5 см воды,
подключают колбу с
колонкой к
водоструйному насосу. Сливают элюат из
колбы в мерную
пробирку и
измеряют точно объем
- V - (должно быть ~ 10 мл).
1
Отбирают 1 мл
экстракта, прибавляют к нему 1 мл
этанола и 1 мл
(1,2 г)
прокаленной сернокислой меди,
перемешивают, дают
отстояться и аликвоту 0,1 - 0,2 мл анализируют методом ТСХ.
Примечание: можно (за исключением
образцов, содержащих крахмал, например картофеля, зерна) вместо
концентрирования вымораживанием использовать только способ концентрирования
упариванием, но при этом использовать небольшие выпарительные чашки, а пробу
доливать в чашку по мере упаривания. Упаривать осторожно, чтобы остаток в чашке
каждый раз был не менее 2 мл. При этом способе концентрирования перед очисткой
на колонке экстракт в чашке (2 - 3 мл) охлаждают 10 минут в холодильнике (t +4
- 6 °C). К охлажденному экстракту прибавляют ацетон, как описано ниже.
Одновременно готовят элюат
контрольного образца. Из полученного контрольного элюата
(10 мл) отбирают в две пробирки по 1 мл, в одну из которых прибавляют
микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония (0,1 мл рабочего
стандартного раствора 2). Если нет возможности подготовить экстракт
контрольного образца (см. п. 2.1.3), то обязательно от полученного элюата исследуемого образца отбирают 1 мл и прибавляют в
него микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония. Далее
прибавляют по 1 мл этанола и поступают, как описано выше для исследуемого
образца.
2.5.2. Тонкослойная хроматография
Пластинку
"Силуфол" размером
15 x 15 см делят на 5 полосок
шириной 3
см. С нижнего края пластинки, на
расстоянии 1,5 см от
края, по центру каждой полосы наносят микропипеткой
(шприцом) или
пипеточным дозатором
по 0,2 мл
контрольного элюата,
элюата с
внесенным глуфосинатом
аммония, элюата исследуемого образца, 0,2
мл рабочего
стандартного раствора 3, что соответствует
0,2 мкг, и
0,1 мл рабочего стандартного раствора 2, что
соответствует 1 мкг.
Пластинку при
нанесении проб и
стандартов для более быстрого
испарения воды
можно подогревать на
электрогрелке. Когда вода
испарится, пластинку
помещают в хроматографическую камеру,
в
которую налита смесь метанол
- аммиак (7:3). Дают
растворителю
подняться на
10 см от
старта и вынимают пластинку из
камеры.
Помещают ее под
УФ-свет на 25 минут, располагая на расстоянии 20
см от источника
света. После облучения
опрыскивают пластинку
проявляющим реагентом
и помещают на 1 мин. в сушильный
шкаф при
температуре 40
°C. Затем вынимают
из шкафа и
оставляют при
комнатной температуре (исключить
прямое попадание солнечного
света). Через
5 - 7
минут проявляются сиренево-красного цвета
пятна глуфосината аммония
с R 0,7 +/- 0,5, в том числе стандарт,
f
внесенный в контрольный экстракт (или элюат
исследуемого образца).
Сразу после
проявления стандартов проводится оценка содержания
пестицида в
исследуемом образце.
Примечание:
при увеличении температуры и
времени прогрева, а
также при более
длительном хранении (уже
после проявления
стандартов) в
некоторых образцах проявляются
коэкстрактивные
вещества с
R 0,68 +/- 0,05 и 0,72 +/- 0,05, 0,5 +/-
0,05.
f
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественное определение
проводится путем визуального
сравнения интенсивности
окраски и размера
пятен пробы и пятен
стандартных
растворов. При этом следует обратить внимание на пятно
стандарта, содержащего
0,2 мкг, и пятно, где 0,2 мкг внесено в
пробу. Наиболее
точно (ошибка +/-
11%) количественная оценка
достигается при концентрациях 0,2 - 1 мкг. При большем
содержании
баста в исследуемом образце необходимо разбавить элюат (исходный
объем V = 10
мл) и повторить ТСХ-определение, как описано выше в
1
п. 2.5.2.
Расчет
результатов содержания баста
в образце проводят по
следующей
формуле:
A x V x B x K
1
X = --------------,
V x P
2
где:
X - содержание баста
в образце, мг/кг;
A - содержание баста,
найденное в образце на пластинке, мкг;
V -
общий объем водного элюата, мл;
1
B - кратность разведения V ;
1
V
- объем этанольного экстракта,
нанесенного на пластинку,
2
мл;
P - масса анализируемой
пробы, мл или г (для растений с учетом
взятой аликвоты соответствует 1/2 навески);
K
- коэффициент, учитывающий
потери при концентрировании
вымораживанием
до объема 2 - 3 мл, равен 1,2.
3. Техника
безопасности
Соблюдаются обычные требования по технике
безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами
и щелочами.