Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6107-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭКСПРОМТА В ВОДЕ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ
В ТОНКОМ СЛОЕ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика пестицида
Экспромт - смесь препаратов "хардин" (12,5% по мочевине) и "грамекс" (12,5% по мочевине) в соотношении 3:1
(весовые).
Действующее вещество хардина
- комплекс диэтилэтаноламина и
N-(2-хлор-бензол-сульфонил)-N'-(6-метокси-4-метил-1,3,5-триазин-2-ил)мочевины (хлорсульфурона).
Структурная формула:
┌─ ─┐ CH CH OH
│ CH │
2
2
│ Cl 3 │
/
│
_____/ N_____/ │ /
│ //
\\_SO NHCONH_// \\__N │N___C H
│ \ ___ / 2
\ ___ / │ \ 2 5
│
--- N --- \ │
\
│ OCH │
C H
│ 3 │ 2 5
└─ ─┘
Эмпирическая формула: C H ClN O S x C H NO.
12 12 5 4
6 15
Молекулярная масса 474,5.
Синонимы: глин, ХСТТ, хлорсульфурон.
Хардин - препарат, представляющий собой раствор действующего вещества в
смеси вода - триэтиленгликоль (1:1, вес. %) с
добавкой 0,4% ОП-10. Содержание комплекса в растворе 16,5 +/- 0,5% (вес.).
Плотность препарата
при 20 °C - 1115 - 1125 кг/куб. м. Т. кип. - 100 °C, хорошо растворим в воде, в
полярных растворителях коагулируется, с неполярными не смешивается, нелетуч, в водных растворах устойчив в течение года, при
разбавлении водой на свету при pH 5 - 7 и 20 °C
разлагается.
ОБУВ в воздухе - 5 мг/куб. м.
Хлорсульфурон -
белое кристаллическое вещество. Эмпирическая
формула C
H ClN O
S, мол. масса 357,78. Т. пл. 174 - 178 °C.
12 12 5 4
Растворимость в
толуоле - 0,3%, метаноле - 1,8%, ацетоне - 7,0%.
Препарат выпускается в
виде аминных солей
(диметиламинная,
изопропиламинная, моноэтаноламинная).
Степень чистоты - 96 - 98%.
Действующее вещество препарата грамекс -
комплекс
диэтилэтаноламина и N-O(метил-карбокси-сульфонил)-N'-(4-метил-6-
метокси-1,3,5-триазин-2-ил)мочевины (грамекса).
Структурная формула:
┌─ ─┐ CH CH OH
│ COOH CH │
2 2
│ 3 3 │
/
│
_____/ N_____/ │ /
│ //
\\_SO NHCONH_// \\N │N___C H
│ \ ___ / 2
\ ___ / │ \ 2 5
│
--- N --- \ │
\
│ OCH │
C H
│ 3 │ 2 5
└─ ─┘
Эмпирическая формула C H O N S
x C H NO.
14 18 6 5 6 15
Молекулярная масса - 498,92.
Химически
чистый грамекс - кристаллическое вещество
слабо-желтого
цвета, без запаха. Т. пл. 162 - 164 °C.
Эмпирическая формула C H O N
S, молекулярная масса - 381,36.
14 18 6 5
Препарат хорошо растворим в ацетоне.
Степень чистоты - 99,1%.
Препарат "экспромт"
представляет собой светло-желтую прозрачную жидкость со слабым аминным запахом, плотность - 1,116 г/куб. см, растворим в
воде.
ДОК, ПДК, МДУ экспромта в настоящее время
не установлены.
2. Методика
определения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении хардина и грамекса (действующие
вещества пестицида "экспромт") из подкисленной пробы воды
хлороформом, концентрировании экстракта и хроматографировании
его аликвоты в тонком слое пластин "Силуфол". В качестве подвижной фазы могут быть
использованы: бензол - ацетон в соотношении 4:1 (объемн.),
гексан - ацетон в соотношении 1:1 (объемн.), диэтиловый эфир.
Для обнаружения зон локализации
препаратов на хроматограммах используют смесь
растворов бромфенолового синего и азотнокислого
серебра с последующей обработкой хроматограмм
лимонной (или уксусной) кислотой. Количественное определение препаратов
проводят сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандарта.
2.1.2. Метрологическая характеристика
Диапазон определяемых концентраций 0,005
- 0,02 мг/л.
Предел обнаружения - 0,5 мкг.
Размах варьирования: хардин
- 80 - 100%,
грамекс - 80 - 100%.
Среднее значение определения стандартных
количеств:
хардин
- 90,0%,
грамекс
- 92,0%.
Стандартное отклонение среднего:
хардин
- +/- 0,61%,
грамекс -
+/- 0,74%.
Относительное стандартное отклонение
среднего:
хардин
- 0,05,
грамекс
- 0,052.
2.1.3. Избирательность метода
Метод специфичен. Другие соединения этого
класса (круг, эллипс) в указанных условиях хроматографирования
определению не мешают.
2.2. Реактивы и
материалы
Хардин (хлорсульфурон), ВНИИХСЗР, 96 - 98%.
Грамекс, ВНИИХСЗР, 99,1%.
Хлороформ, хч,
ГОСТ 20015-74.
Ацетон, чда,
ГОСТ 2603-79.
Бензол, хч,
ГОСТ 5955-81.
Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Этиловый спирт, 96-процентный, ТУ
6-09-1910-77.
Кислота хлористоводородная, ч, ГОСТ 3118-77; водный раствор (1:1).
Кислота уксусная, хч,
ГОСТ 18290-72, 5-процентный водный раствор.
Кислота лимонная, хч,
ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор.
Аммиак водный, чда,
ГОСТ 3760-79.
Серебро азотнокислое, чда,
ГОСТ 1277-81.
Бромфеноловый синий, чда, ТУ
6-09-3719-83.
Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76.
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.
Пластинки "Силуфол"
(Kavalier, ЧССР).
Вата гигроскопическая.
2.3. Приборы,
посуда
Весы аналитические ВЛА-200М.
Испаритель ротационный ИР-1М,
25-11-917-74.
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.
Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ
25336-82.
Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82,
вместимостью 50 - 100 мл.
Колбы мерные, цилиндры, мензурки,
пробирки, ГОСТ 1770-74.
Колбы конические плоскодонные, ГОСТ
25336-82.
Воронки химические, диаметр 56 мм, ГОСТ
25336-82.
Воронки делительные, ГОСТ 25336-82,
вместимостью 250 мл, 1 л.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1; 5; 10 мл.
Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2
мл.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.
Скальпель.
Камера для хроматографирования,
ГОСТ 25336-82.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Приготовление стандартных рабочих
растворов хардина, грамекса
Стандартные растворы пестицидов
концентрации 100 мкг/мл готовят растворением соответствующей навески препарата
в ацетоне (или этиловом спирте) в мерной колбе на 100 мл. Растворы хранят в холодильнике.
Годны к употреблению в течение 30 дней. Рабочие
растворы пестицидов концентраций 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл готовят в
градуированных пробирках вместимостью 10 мл соответствующим разбавлением
ацетоном стандартных растворов. Хранят рабочие растворы хардина,
грамекса в холодильнике. Годны
к употреблению в течение 3 - 5 дней.
2.4.2. Проявляющий реактив - бромфеноловый реагент
Смесь растворов бромфенолового
синего (БФС) и азотнокислого серебра. Готовят два раствора: 1. 0,5%
водно-ацетоновый (1:3) раствор азотнокислого серебра; 2. 10 мл 0,05-процентного
раствора бромфенолового синего в ацетоне. Раствор 2
разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Хранят проявляющий реактив в темном
прохладном месте. Годен к употреблению в течение 3 - 5
дней. После обработки хроматограмм бромфеноловым реагентом осветляют фон обработкой пластин
2-процентным водным раствором лимонной кислоты или 5-процентным водным
раствором уксусной кислоты.
2.4.3. Подготовка пластин "Силуфол"
Пластинку "Силуфол"
помещают в хроматографическую камеру, содержащую
смесь растворителей ацетон - 25-процентный аммиак в соотношении 7:3 (об./об.) (глубина погружения
пластинки в растворитель составляет 0,5 см). После подъема фронта растворителя
до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до
испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению. Хранят
подготовленные пластинки в эксикаторе.
2.5. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (МЗ СССР, ГСЗУ, Москва,
1980, N 2061-79 от 21.08.1979).
Отобранные пробы хранить в стеклянной
таре в защищенном от света месте не более 1 - 3 суток.
2.6. Проведение
определения
2.6.1. Экстракция и очистка
На одно определение берут на
анализируемый образец две пробы воды по 500 мл.
500 мл воды
помещают в делительную воронку вместимостью 1 л, подкисляют до pH 2 разбавленной кислотой (берут 1 мл раствора кислоты) и
экстрагируют препарат дважды свежими 10 - 15 мл хлороформа, каждый раз
встряхивая содержимое воронки в течение 2 - 3 мин. Экстракты двух проб
объединяют (получают 40 - 60 мл) в делительной воронке вместимостью 250 мл,
промывают 10 - 15 мл дистиллированной воды,
подкисленной до pH 6 разбавленной хлористоводородной
кислотой, и фильтруют через слой (7 - 10 г) безводного сульфата натрия в
химической воронке в грушевидную колбу. Растворитель отгоняют до объема около 1
мл на ротационном испарителе при температуре 55 - 60 °C. Остаток растворителя
удаляют продуванием воздуха.
2.6.2. Хроматографирование
Сухой остаток в колбе растворяют
в 1 мл ацетона (этанола),
закрывают колбу герметично пробкой, перемешивают
содержимое и 0,2
мл полученного
раствора наносят микропипеткой на
подготовленную
пластинку "Силуфол". Рядом
с пробой наносят по 0,2 мл каждого
рабочего
раствора пестицидов, что соответствует содержанию в пятне
0,5; 1,0; 2,0;
4,0 мкг каждого
препарата (растворы хардина и
грамекса одинаковой концентрации наносят в одну
точку). Пластинку
помещают в хроматографическую
камеру, куда за 10 - 15 мин. до
хроматографирования
наливают один из
подвижных растворителей,
указанных в таблице,
в таком количестве, чтобы глубина погружения
пластинки в
растворитель составила 0,5 см.
После подъема фронта
растворителя от
линии старта на высоту 10 см хроматографирование
прекращают. Пластинку
выдерживают в вытяжном шкафу до
испарения
растворителей и
обрабатывают бромфеноловым реагентом,
затем
раствором лимонной
(или уксусной) кислоты. О наличии экспромта в
пробе свидетельствует проявление
на хроматограмме серо-синего
пятна хардина либо
пятен хардина и грамекса (в
зависимости от
количества экспромта
в пробе). Величины
R хардина,
грамекса
f
приведены в таблице.
Таблица
ВЕЛИЧИНЫ R
ПРОИЗВОДНЫХ МОЧЕВИНЫ НА ПЛАСТИНКАХ "СИЛУФОЛ"
f
┌─────────────┬───────────────────────────────────────────────────────────┐
│
Соединение │ Подвижный растворитель │
│ ├─────────────────────┬─────────────────────┬───────────────┤
│ │бензол - ацетон (4:1)│гексан - ацетон (1:1)│диэтиловый
эфир│
├─────────────┼─────────────────────┼─────────────────────┼───────────────┤
│Грамекс │0,28 │0,41 │0,70 │
│Хардин │0,33 │0,35 │нечеткое пятно │
│Круг │0,37 │0,53 │нечеткое пятно │
│Эллипс │0,43 │0,63 │нечеткое пятно │
└─────────────┴─────────────────────┴─────────────────────┴───────────────┘
2.7. Обработка
результатов анализа
Количественная оценка хардина,
грамекса, являющихся действующими веществами
экспромта, проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен
пробы и рабочих растворов пестицидов. Содержание каждого пестицида в
анализируемой пробе рассчитывают по формуле:
A x V
X = ------,
V x P
1
где:
X - содержание хардина,
грамекса в исследуемой пробе, мг/л;
A - количество хардина,
грамекса, найденное путем сравнения со
стандартами,
мкг;
V - объем рабочей пробы, мл;
V
- объем аликвоты,
отобранной для хроматографирования,
мл.
1
При нанесении
всей пробы V = V;
1
P -
объем исследуемой пробы, мл.
3. Требования
безопасности
Соблюдать все необходимые требования
безопасности при работе в химических лабораториях.