Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
В.И.ЧИБУРАЕВ
29 июля 1991 г. N 6125-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТРЕФЛАНА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ
ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика вещества
Название по номенклатуре СЭВ, ИСО: трефлан (нитран, олитреф, трифлуралин).
Химическое название:
2,6-динитро-4-трифторметил-N,N-дипропиланилин.
NO
_____/
2
F O_//
\\___N(C H )
3 \
___ / 3 7 2
--- \
NO
2
Эмпирическая формула: C H F N
O .
13 17 3 3 4
Молекулярная масса: 335,28.
Физико-химические свойства: кристаллическое вещество
желто-оранжевого цвета; Т. пл. 48,5 - 49 °C, Т. кип. 139 - 140
°C
-6
при 4,2 мм
рт. ст. Растворимость в 100 г воды при 27 °C 1 x 10
г. Хорошо
растворим в ароматических углеводородах и их
хлорпроизводных,
ацетоне, этилацетате, дихлорэтане. Растворим в
гексане.
Трефлан устойчив при хранении в темноте. В тонком
слое и в растворе на солнечном свету разлагается.
МДУ в мг/кг: в
луке, чесноке, капусте, томате, баклажанах, перце, сое, табаке, семенах
подсолнечника - 0,5; моркови - 0,01; соевом и подсолнечном масле - 0,1.
Применяется в качестве гербицида в
посевах хлопчатника, сои, гороха, подсолнечника, табака, фасоли, томатов. В
смесевых препаратах применяется в посевах зерновых культур.
2. Методика
определения трефлана в зеленой массе и зерне
зерновых культур методом газожидкостной
хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении трефлана из зеленой массы культур экстракцией органическим
растворителем, очистке экстракта колоночной хроматографией и
газохроматографическом определении на приборе с детектором по захвату
электронов. Количественное определение проводят по методу абсолютной
калибровки.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Диапазон определяемых концентраций 0,0005
- 1,25 мг/кг.
Предел обнаружения в анализируемом объеме
0,0001 мкг.
Предел обнаружения в пробе 0,0005 мг/кг.
Среднее значение определения стандартных
количеств 92,7%.
Число параллельных определений n = 9.
Стандартное отклонение +/- 2,5%.
Относительное стандартное отклонение
0,03.
Доверительный интервал среднего при P =
0,95 и n = 1 составляет 92,7 +/- 1,6%.
2.1.3. Избирательность метода
Определению не мешают пестициды ряда феноксиалканкарбоновых кислот и тиокарбаматы.
2.2. Реактивы и
материалы
Трефлан с содержанием основного вещества не менее 96%.
Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-74.
Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.
Алюминия оксид Л 40/250 щелочной для
колоночной хроматографии производства ЧССР.
Насадка для хроматографической
колонки - хроматон N-AW-DMCS (фр. 0,20 - 0,25 мм) с
5% ДС-550 фирмы "Хемапол".
Азот особой чистоты газообразный, ГОСТ
9293-74, в баллоне с редуктором.
Бумага фильтровальная.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Хроматограф с детектором по захвату
электронов.
Колонка стеклянная 200 x 0,3 см.
Колонка стеклянная 30 x 0,8 см.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ
25-11-917-74.
Колбы мерные, цилиндры, мензурки, ГОСТ
1770-74.
Колбы грушевидные для отгонки
растворителя вместимостью 100 мл, ГОСТ 25336-82.
Пипетки различной вместимости, ГОСТ
20292-74.
Воронки конусообразные, ГОСТ 25336-82.
Мельница лабораторная (кофемолка).
Микрошприц МИ-10М, ТУ 2-833-106.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Приготовление стандартных
растворов
Стандартный раствор N 1 трефлана концентрации 1000 мкг/мл готовят в мерной колбе на
100 мл растворением навески 0,1 г в гексане.
Стандартные растворы N 2 - 7 трефлана концентрации 0,05; 0,10; 0,25; 0,50; 1,00 и 2,50
мкг/мл готовят в мерных колбах на 100 мл разбавлением 0,005; 0,010; 0,025;
0,050; 0,100 и 0,250 мл стандартного раствора N 1 гексаном.
Срок хранения растворов один месяц в
холодильнике.
2.4.2. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика
трижды хроматографируют по 2 мкл
стандартных растворов N 2 - 7 при условиях, описанных в разделе 2.6. Измеряют
высоты пиков трефлана и по средним значениям трех
измерений строят график зависимости высоты в мм от
количества трефлана в аликвоте
в нг.
2.4.3. Подготовка колонки для очистки
экстракта
Стеклянную колонку 30 x 0,8 см заполняют
при легком постукивании щелочным оксидом алюминия на высоту 10 см.
2.5. Отбор пробы
Отбор пробы проводится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем
Главного государственного санитарного врача СССР за N 2051-79 от 21 августа
1979 года.
2.6. Проведение
определения
Навеску зеленой массы и зерна (20 г)
измельчают на кофемолке.
Муку помещают в коническую колбу с
притертой пробкой, заливают 20 мл ацетонитрила,
встряхивают в течение 0,5 ч и отфильтровывают под вакуумом. Экстракцию
повторяют свежей порцией ацетонитрила (20 мл).
Экстракты после фильтрации последовательно пропускают через бумажный фильтр и
концентрируют до 0,5 - 1 мл на ротационном испарителе при температуре бани не
выше 50 °C, затем до отсутствия ацетонитрила - в токе
воздуха. Маслянистый остаток очищают колоночной хроматографией. До внесения
экстракта колонку с оксидом алюминия промывают гексаном
(10 мл). Остаток экстракта растворяют в 1 мл гексана
и переносят в колонку. Колбу обмывают 3 раза 1 мл гексана и смывы также переносят в колонку.
Растворитель отсасывают под вакуумом, трефлан элюируют в отгонную колбу со скоростью 60 - 80 капель в
мин. 40 мл гексана. Элюат
концентрируют до 0,5 - 10 мл и 2 мкл раствора хроматографируют на приборе с электронзахватным
детектором при следующих условиях:
-11
рабочая шкала электрометра - 9 x 10 А;
скорость протяжки картограммы - 200
мм/час;
колонка стеклянная длиной 200 см,
диаметром 3 мм, заполненная хроматоном N-AW-DMCS (фр.
0,20 - 0,25 мм) с 5% ДС-550;
температура в °C: термостата колонок -
180, испарителя - 250, детектора - 230;
расход газа-носителя в мл/мин.: через
колонку - 40, через продувочную камеру детектора - 60;
объем раствора пробы, вводимый в
испаритель, - 2 мкл;
линейность детектирования 0,1 - 5 нг;
абсолютное время удерживания - 2,11 мин.
Хроматографирование каждого экстракта проводят трижды, измеряют высоты пиков, вычисляют
среднее значение высоты. По градуировочному графику и
высоте пика находят количество трефлана в
анализируемом объеме экстракта.
2.7. Обработка
результатов анализа
Содержание трефлана
в пробе (X) в мг/кг вычисляют по формуле:
А x V x 100
2
X = ------------,
V x P x R
1
где:
A
- количество трефлана
в хроматографируемом объеме раствора
пробы, найденное по градуировочному
графику, нг;
V -
объем аликвоты раствора пробы, вводимой в прибор, мкл;
1
V -
общий объем раствора пробы, мл;
2
P - навеска пробы, г;
R
- среднее значение
определения стандартных количеств
трефлана, найденное
предварительно, %.
3. Требования
безопасности
Соблюдать все необходимые требования
безопасности при работе в химических лабораториях, а также "Правила
устройства, техники безопасности, производственной санитарии,
противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях
(отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Минздрава
СССР", N 2455-81 от 20.10.81.