Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6127-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2,4-Д В ВОДЕ МЕТОДОМ ОБРАЩЕННО-ФАЗОВОЙ
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Краткая характеристика препарата
приведена в Методических указаниях.
2. Методика
определения 2,4-Д в воде
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на концентрировании 2,4-Д в
пробе и последующем определении препарата с помощью обращенно-фазовой
ВЭЖХ.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Среднее значение определения (%) - 90
Стандартное отклонение (%) - 8,06
Относительное стандартное отклонение (%) -
3,61
Доверительный интервал (+/- %) - 2,95
Предел обнаружения (мг/л) в неочищенной и
очищенной пробе - 0,7 и 0,002.
2.1.3. Избирательность метода
Метод избирателен в присутствии
глобальных загрязнителей окружающей среды - производных циклопарафинов
(у-ГХЦГ и его изомеры), соединений дифенилметанового
ряда (ДДТ и его производные), а также галакона, глифосата и других гербицидов, применяемых на зерновых
культурах.
2.2. Реактивы и
растворы
Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72.
н-Гексан, ч, ТУ
6-09-3375-78.
Метанол, хч,
ГОСТ 6995-77.
Натрия сульфат, безводный, ч, ГОСТ 4166-76.
Натрия гидрокарбонат, чда,
ГОСТ 4201-66.
Универсальные индикаторные бумаги pH 0 - 12 "Lachema" (ЧCCP).
Фильтры "синяя лента", ТУ
6-09-1678-77.
Хлороформ, Фармакопея СССР, ГОСТ
20015-74.
Хлористоводородная кислота, ч, ГОСТ 3118-77.
Эфир для наркоза, Фармакопея СССР, ГОСТ
6265-74.
Стандартный раствор 2,4-Д в воде с
концентрацией 10 мкг/мл.
2.3. Приборы и
посуда
Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ
24104-80.
Весы технические типа ВЛКТ-500, ГОСТ
24104-80.
Испаритель ротационный типа ИР-1М2, ТУ
25-1173-102-84.
Микроколонка стандартная металлическая (50 x 2 мм) с сорбентом
"Силасорб C ", 5
мкм, "Chemapol" (ЧССР).
18
Хроматограф микроколоночный
жидкостный типа "Милихром".
Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, на
250 мл.
Воронки конические, ГОСТ 25336-82.
Колбы конические с пришлифованной
пробкой, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.
Колбы круглодонные со шлифом, ГОСТ
25336-82, на 100 мл.
Колбы плоскодонные, ГОСТ 25336-82, на 250
мл.
Пипетки мерные, ГОСТ 20292-74, на 1 мл.
Пробирки мерные, ГОСТ 1770-74, на 10 мл.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 и
25 мл.
Линейка металлическая, ГОСТ 25706-83.
2.4. Отбор,
хранение и подготовка проб
Отбор, хранение и подготовка проб к
анализу проводятся в соответствии с "Унифицированными правилами отбора
проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей
среды для определения микроколичеств
пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного
санитарного врача СССР 21.08.79 за N 2051-79.
2.5. Подготовка к
определению
2.5.1. Приготовление элюента
Элюирующая смесь вода - метанол в объемном соотношении 7:3 готовится заранее,
перед проведением хроматографического анализа.
Цилиндром вместимостью 100 мл отмеряют 70 мл дистиллированной воды, которую
выливают в плоскодонную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 100 мл;
туда же приливают 30 мл метанола, колбу закрывают пробкой, содержимое
перемешивают при легком взбалтывании и дают смеси отстояться в течение 30 - 40
мин., после чего фильтруют в сосуд для элюента. Элюент отстаивают еще некоторое
время (до прекращения образования пузырьков воздуха на стенках сосуда) и
приступают к подготовке хроматографической системы
прибора к анализу.
2.5.2. Подготовка хроматографической
системы к проведению определения 2,4-Д. Подготовку прибора к хроматографическому анализу начинают с промывки насоса
свежеприготовленным элюентом, после чего насос заполняют элюирующей
смесью вода - метанол (7:3) и приступают к промывке хроматографической
системы и заполнению кюветы сравнения элюентом. Подготовка хроматографа
продолжается до установления равномерного нулевого выходного сигнала детектора
и снижения шумов до минимума.
2.6. Проведение
анализа
2.6.1. Экстракция препарата из
анализируемой пробы
Чистую пробу воды (прозрачная и
бесцветная) фильтруют через складчатый фильтр и проводят хроматографический
анализ неочищенной пробы, вводя в колонку от 5 до 40 мкл
(вводимый объем берется по усмотрению оператора, но не более 40 мкл).
Если проба воды
грязная (мутная и окрашена или содержит сопутствующие примеси природных
органических соединений, других пестицидов, влияющих на проведение анализа),
поступают следующим образом: 100 мл отфильтрованной пробы помещают в плоскодонную
коническую колбу вместимостью 250 мл, туда же добавляют 4 г гидрокарбоната
натрия, взвешенного на технических весах, и, при перемешивании раствора, его
растворяют в пробе, после чего содержимое колбы переносят в делительную воронку вместимостью 250 мл. Для
удаления из пробы влияющих на анализ примесей проводится их переэкстракция
сначала в хлороформ (2 раза по 25 мл), а затем в н-гексан
(2 раза по 25 мл) при взбалтывании содержимого воронки в течение 1 мин.
Растворители, содержащие сопутствующие примеси пробы, отбрасывают, а водный
раствор сливают в колбу вместимостью 250 мл и постепенно приливают туда 1 мл
хлористоводородной кислоты, раствор перемешивают при легком
взбалтывании. После прекращения выделения углекислого газа
раствор переносят в делительную воронку и проводят переэкстракцию
2,4-Д в диэтиловый эфир (2 раза по 20 мл) в течение 1
мин. Водный раствор отбрасывают, а объединенный эфирный экстракт отмывают
дистиллированной водой (до нейтрального pH),
фильтруют через прокаленный сульфат натрия в круглодонную колбу со шлифом
вместимостью 100 мл, упаривают на ротационном испарителе при 30 - 35 °C
до небольшого объема, переносят в мерную пробирку и упаривают в токе азота
особой чистоты досуха. Сухой остаток пробы растворяют в 0,2 мл дистиллированной
воды и проводят хроматографический анализ.
2.6.2. Хроматографическое
определение 2,4-Д методом ВЭЖХ
Количественное определение
2,4-Д проводят при следующих
условиях хроматографирования:
неподвижная фаза - "Силасорб C ", 5
18
мкм; подвижная фаза - вода с метанолом в объемном
соотношении 7:3;
скорость элюирующего потока -
200 мкл/мин.; поддиапазон
чувствительности измерений - 0,2 А;
время измерения выходного
сигнала - 0,6 с; скорость протяжки диаграммной ленты - 300 мм/час;
длина волны
поглощения светового потока
- 280 нм; объем
удерживания -
235 мкл.
После окончания
подготовки прибора к анализу проводится хроматографирование
градуировочного раствора 2,4-Д (10 мкг/мл) в объеме
от 5 до 40 мкл (5, 10, 15, 20, 30, 40 мкл), а затем пробы воды в объеме, необходимом для
обнаружения препарата (но не более 40 мкл), как в несконцентрированной, так и в сконцентрированной (при
необходимости) пробе. Если содержание в
пробе находится за пределом верхней границы обнаружения, часть ее разбавляют в
определенном объеме дистиллированной воды и анализ повторяют при тех же
условиях хроматографирования.
2.6.3. Обработка результатов анализа
Количественное определение 2,4-Д проводят
методом соотношения со стандартами, путем сравнения площадей пиков в
анализируемом образце воды и стандартном растворе.
Расчет проводят по формуле:
S x V x C
1
X = ---------- (мг/л),
S x P
2
где:
S -
площадь пика 2,4-Д в пробе, кв. мм;
1
S -
площадь пика стандартного раствора, кв. мм;
2
C - концентрация стандартного раствора,
мкг/мл;
V - объем анализируемой пробы, мл;
P - конечный объем исходной пробы, мл.
3. Требования
безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила
безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами,
концентрированными кислотами.