Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6131-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЙФИДАНА В ЗЕРНОВЫХ
И ЛЕКАРСТВЕННЫХ КУЛЬТУРАХ, В ВОДЕ И
ПОЧВЕ МЕТОДАМИ
ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Байфидан (триадименол) -
1-4-(хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1-H-1,2,4-триазол-1-ил)бутанол-2.
OH
_____ │
Cl_//
\\_O__CH__CH__C(CH ) C H ClN O .
\ ___ / │ 3 3 14 18 3 2
--- N
/\ М.м. 295,8.
/ \N
││__││
N
Химически
чистый байфидан -
бесцветный кристаллический
порошок,
устойчив в кислых, нейтральных и щелочных средах.
ЛД
для крыс 700 - 1200 мг/кг.
50
Байфидан - высокоэффективный фунгицид с системными свойствами из группы
действующих веществ, относящихся к азоловым
соединениям. Продукт отличается очень хорошим действием против настоящих
мучнисто-росяных грибов и против различных ржавчинных болезней. Наряду с
хорошим защитным действием байфидан обладает также
лечебным и искореняющим действием. Байфидан
применяется при воздействии зерновых культур, в овощеводстве, виноградарстве,
при выращивании огурцов и дынь, а также в декоративном цветоводстве. Норма
расхода - 125 г д.в. на га, то есть 0,5 л препарата на га.
Байфидан выпускается в виде эмульгирующего
концентрата с 250 г триадеменола на 1 л (250 к.э.).
2. Методика
определения байфидана
2.1. Основные
положения
Метод основан на извлечении байфидана из анализируемой пробы органическим растворителем,
очистке экстракта на колонке окиси алюминия с последующим определением методами
газожидкостной хроматографии с термоионным (ТИД) детектором и тонкослойной
хроматографии на пластинках "Силуфол".
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода (см. табл. 1)
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
БАЙФИДАНА
┌────────┬────────┬───────┬───────┬───────────┬────────┬────────┬─────────────┐
│Препарат│ Объект │Мини- │Нижний │Размах │Среднее │Стан- │Доверительный│
│ │ │мальное│предел
│варьирова- │значение│дартное │ интервал
│
│ │ │детек- │опреде-│ния, % │опреде- │отклоне-│
среднего │
│ │ │тируе- │ления, │
│ления,
│ние,
│ при n = 5, │
│ │ │мое │мг/л, │
│% │% │
P = 0,95 │
│ │ │количе-│мг/кг │ │ │ │ │
│ │ │ство, │
│ │ │ │ │
│ │ │мкг │ │ │ │ │ │
├────────┼────────┼───────┼───────┼───────────┼────────┼────────┼─────────────┤
│Байфидан│зерно │
│0,020 │70,0 - 90,0│83,3 │+/- 2,67│83,5 +/- 5,6 │
│ │почва │0,004
│0,012 │72,0 - 95,0│90,8 │+/- 2,84│90,8 +/- 6,8 │
│ │вода │ │0,007 │95,0 - 100 │98,3 │+/- 3,99│98,3 +/- 7,7 │
│ТСХ │лекарст-│1,0
│0,1 │70 - 88 │78,9 │+/- 4,77│+/- 5,99 │
│ │венные │
│ │ │ │ │ │
│ │культуры│ │ │ │ │ │ │
└────────┴────────┴───────┴───────┴───────────┴────────┴────────┴─────────────┘
2.1.3. Избирательность метода
Другие препараты по сфере применения в
данных условиях хроматографирования определению не
мешают.
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, чда,
ГОСТ 2603-79.
Этилацетат, хч,
ГОСТ 22300-76.
Хлористый кальций, ГОСТ 4161-77.
Хлороформ медицинский, фармакопея, ГОСТ
20015-74.
Спирт этиловый, ГОСТ 5962-67.
Окись алюминия II ст. активности, ГОСТ
8136-85.
Натрий сернокислый, безводный, хч, ГОСТ 4166-77.
Лимонная кислота, чда,
ГОСТ 908-79.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Водород из баллона, ГОСТ 3022-80, или
получаемый из генератора водорода.
Воздух из баллона, ГОСТ 9-01-80, или
нагнетаемый компрессором.
3% OV-17 на газохроме
(0,16 - 0,20 мм).
5% E-301 на хроматоне
N-AW-DMCS.
Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-4530-77.
Азотнокислое серебро, ГОСТ 1277-75.
Стандартный раствор байфидана
в спирте или ацетоне 1 мг/мл (I), из него готовится серия растворов с
концентрацией 25 мкг/мл (II), 10 мкг/мг (III).
Проявляющие реактивы:
1. 0,4% ацетоновый раствор бромфенолового синего с 2% водным раствором азотнокислого
серебра в равных объемах.
2. 2% водный раствор лимонной кислоты.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ
25-11-917-76.
Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 300
мл.
Круглодонные колбы, ГОСТ 25336-82, на 250
мл.
Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1 или
0,2 мл.
Воронки конические, ГОСТ 25336-82.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, емк. 50
мл.
Микропипетки, ГОСТ 20292-74.
Микрошприц МШ N 10, ТУ 2-833-024.
Делительные воронки, ГОСТ 25336-82.
Хроматограф "Цвет-106",
"Цвет-500" или аналогичный с ТИД.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб" N 2051-79 от 21.08.79.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция
Вода. 200 мл воды в делительной воронке
экстрагируют дважды по 100 - 200 мл этилацетата в течение 3 - 5 минут.
Осушенный и объединенный экстракт концентрируют на ротационном испарителе.
Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, аликвоту
вводят в хроматограф.
Почва, зерно. 100 г почвы или 10 - 20 г
измельченного зерна экстрагируют 100 - 200 мл этилацетата на встряхивателе в течение 1 часа. Затем экстракцию повторяют,
встряхивая анализируемую пробу в течение 30 минут со 100 мл этилацетата.
Осушенный и объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе до объема
2 - 3 мл и проводят очистку.
Лекарственное сырье. Измельченную навеску
лекарственного сырья (30 г сырого и 5 г сухого) заливают ацетоном (100 и 30
мл). Остаток промывают на фильтре дважды ацетоном. Ацетон отгоняют до 5 - 10
мл.
2.5.2. Очистка экстракта
Почва, зерно. Сконцентрированный экстракт
переносят в бюкс, заполненный
5 - 10 г окиси алюминия. Колбу дважды смывают этилацетатом по 1 мл и также
переносят в бюкс. Затем ставят бюкс на песочную баню
(60 °C) и выдерживают до полного улетучивания этилацетата. Стеклянной палочкой
тщательно перемешивают сорбент в бюксе и переносят в делительную воронку, в
узкий конец которой помещают тампон из гигроскопической ваты. Для элюирования байфидана через колонку пропускают 400 мл воды. Скорость
вытекания 120 кап./мин.
Водный раствор экстрагируют хлороформом (3 раза по 50 мл), встряхивая каждый
раз в течение 2 мин. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр и
безводный сернокислый натрий в грушевидную колбу и выпаривают на ротационном
испарителе до 0,2 мл, а затем остаток высушивают током воздуха. Сухой остаток
растворяют в 1 мл ацетона.
Лекарственное сырье.
К ацетоновому экстракту добавляют
5 мл
0,05 н и CaCl и
ставят в морозильную
камеру на 1 час. Затем
2
экстракт фильтруют
через фильтр "синяя лента", добавляют 25 мл
воды и
экстрагируют байфидан этилацетатом
(3 раза по 25 мл).
Объединенный этилацетатный экстракт
упаривают на ротационном
испарителе до объема
5 мл. Далее поступают, как при очистке почвы
и зерна. Остаток
растворяют в 0,5 мл ацетона или спирта.
2.5.3. Условия газожидкостной хроматографии
Определение
проводят на хроматографе
"Цвет" с термоионным
детектором.
Используют стеклянную колонку длиной 1
м, диаметром 3
мм, носитель - газохром (0,16
- 0,20 мм с 3% OV-17), температура
колонки - 230
°C, испарителя - 290 °C. Время удерживания
- 1 мин.
30 сек.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 1 - 6 нг.
-10
Рабочая шкала
2 x 10
. Для колонки
с 5% E-301 температура
испарителя 230
°C, температура колонки 210 °C, рабочая шкала ИМТ -
-10
2 x
10 . Время удерживания - 1 мин. 15 сек. Для обеих
колонок
расход азота
75 мл/мин., воздуха
- 150 мл/мин., водорода - 27
мл/мин. Скорость
движения ленты самописца - 600 мм/час.
2.5.4. Условия хроматографирования
в тонком слое
Определение байфидана
проводят методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол". С помощью микропипетки наносят на пластинку
0,1 мл экстракта. На расстоянии 2 - 3 см наносят 3 - 4 пятна стандартного
раствора байфидана (1 мкг, 3 мкг, 5 мкг, 10 мкг).
Пластинку хроматографируют в системе гексан:ацетон (3:2).
После
того как фронт
растворителя поднимается на 10 см,
пластинку вынимают
из камеры, сушат
на воздухе и опрыскивают
последовательно
проявляющими реактивами 1 и 2. При наличии в пробе
байфидана появляется синее пятно. R препарата - 0,72.
f
2.6. Обработка
результатов анализа
Газожидкостное определение
Количественное определение проводят
методом соотношения со стандартом по высоте пика.
Для количественного определения измеряют
высоту пиков проб и стандартных растворов. Содержание в пробе рассчитывают по
формуле:
M
x H x V
ст пр k
X = --------------,
H x V x
M
ст x
где:
X - содержание в пробе, мг/кг или мг/л;
M -
содержание в стандартном растворе, нг;
ст
H -
высота пика стандартного раствора, мм;
ст
H -
высота пика пробы, мм;
пр
V -
объем конечного экстракта, мл;
k
V -
объем экстракта пробы, введенного в испаритель, мкл;
x
M - навеска или объем пробы в г или мл.
Тонкослойная хроматография
Количественное определение содержания байфидана в пробах проводят путем сравнения интенсивности
окраски и площади пятен пробы и стандартных растворов.
Содержание препарата в пробе
рассчитывается по формуле:
A x V
1
X = ------,
V x P
2
где:
X - содержание байфидана в пробе, мг/кг;
A -
количество препарата, найденное
путем визуального
сравнения со
стандартным раствором, в мкг;
V -
объем пробы перед нанесением на пластинку в мл;
1
V -
объем раствора, нанесенного на пластинку, в мл;
2
P - навеска в г.
3. Требования
техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила
безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими
веществами.