Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6152-91

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ 2-АМИНО-4,6-ДИМЕТИЛ-1,3-ПИРИМИДИНА

В ВОДЕ МЕТОДОМ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

 

1. Краткая характеристика препарата

 

2-Амино-4,6-диметил-1,3-пиримидин (аминопиримидин) является полупродуктом получения препаратов "Анкор-5" и "Анкор-85", рекомендуемых в качестве гербицидов, и представляет собой тонкодисперсный порошок светло-серого и белого цвета.

Структурная формула:

 

        N___________CH

        //    \\      3

    NH //      \\

      2\        /

        \______/

        N-----------CH

                      3

 

    Эмпирическая формула С H N .

                          6 9 3

    Молекулярная масса 123,0.

    Растворяется в воде, метаноле, этаноле, метиленхлориде и хлороформе.

    ЛД   для крыс - 970 мг/кг.

      50

ОБУВ аминопиримидина для воды - 20 мкг/л.

 

2. Методика определения аминопиримидина

 

2.1. Основные положения

 

2.1.1. Принцип метода

Определение основано на извлечении анализируемого вещества из воды, насыщенной NaCl, экстракцией метиленхлоридом, концентрировании вещества упариванием растворителя и последующем определении его методом жидкостной хроматографии с УФ-детектором (226 нм) на колонке, заполненной насадкой "Силасорб-600".

2.1.2. Избирательность метода

Метод обеспечивает полную селективность. Определению не мешают полупродукты получения.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Диапазон измеряемых концентраций аминопиримидина в воде от 10 до 50 мкг/л.

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме 2 мкг.

Нижний предел измерения в воде 10 мкг/л.

Суммарная погрешность не превышает 11,40%.

Время выполнения определения (включая отбор образца) аминопиримидина в одной пробе при одновременной подготовке двух параллельных образцов 3 часа.

 

2.2. Реактивы, растворы и материалы

 

Ацетон осч, ТУ 6-09-3513-82.

Хлороформ хч, ТУ 6-09-4263-76.

Метилен хлористый техн., ТУ 6-09-2662-77.

Спирт этиловый, ГОСТ 5963-67.

Спирт изопропиловый хч, ТУ 6-09-402-81.

Гептан нормальный эталонный, ГОСТ 5.395-70.

Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72.

Кислота уксусная ледяная, ГОСТ 61-75.

Раствор 1:10 в изопропиловом спирте.

Бумага индикаторная универсальная.

Окись бария ч, ГОСТ 10203-78.

Натрий хлористый чда, ГОСТ 4233-77.

2-Амино-4,6-диметил-1,3-пиримидин с установленным содержанием не ниже 98%.

 

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

 

Жидкостный хроматограф Милихром с УФ-детектором, ТУ 25-05-2095-77.

Потенциометр ЛКСУ-003, ТУ 25-05-2095-77.

Колонка металлическая 6,3 см с внутренним диаметром 2 мм, заполненная силикагелем "Силосорб-600", с размером частиц 5 мкм.

Цилиндр 4-50, ГОСТ 1770-74.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, вместимостью 100 мл, 50 мл и 25 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 10, 5, 2 мл с делениями.

Делительные воронки, ГОСТ 25336-82, вместимостью 1000 мл.

Микрошприц МШ-10М, ТУ 2-833-106.

Колбы грушевидные, ГОСТ 9737-70, вместимостью 50 мл.

Воронка В-36-50 ХС, ГОСТ 25336-82.

Чашка фарфоровая, ГОСТ 9147-73, вместимостью 250 мл.

Холодильник Х111-1-200-14/23 ХС, ГОСТ 25336-82.

Линейка измерительная, цена деления 1 мм, ГОСТ 4272-75.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Регулятор температуры УКТ-4 У-2, ТУ 25-111378-77.

Термометр контактный типа ТПК, ГОСТ 9871-61.

Термометр, ГОСТ 215-73, ТЛ-2, цена деления 1 °C.

Секундомер механический СОП-пр.2а3-000, ГОСТ 5072-79.

Барометр БК-75, ТУ 35-04-223-75, цена деления 0,1 кПа.

Весы аналитические лабораторные общего назначения, тип ВЛА-200М, ТУ 25-06-1049-72.

Весы лабораторные технические ВЛКТ-500М, 4-ый класс, ГОСТ 24104-80.

Набор разновесов Г-2-210, ГОСТ 7328-82.

Насос водоструйный, ГОСТ 25336-82.

Шкаф сушильный электрический 2В-151, ТУ 64-1-1411-76.

Бюксы СН-60/14 или СН-85/15, ГОСТ 7148-70.

 

2.4. Отбор пробы

 

Отбор пробы воды производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными зам. Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 N 2051-79. Объем средней пробы должен составлять 2 л.

 

2.5. Подготовка к определению

 

2.5.1. Подготовка колонки и элюента

Для кондиционирования колонки через нее пропускают 6 мл элюента со скоростью 200 мкл/мин.

Для приготовления элюента смешивают гептан, метанол, изопропанол, хлороформ и уксусную кислоту (1:10 в изопропиловом спирте) в соотношении 60:5,5:3,5:1,5:0,1 по объему.

Метанол перед употреблением сушат окисью бария (0,5 л метанола - 50 г окиси бария), фильтруют и перегоняют.

2.5.2. Подготовка стандартных и градуировочных растворов

Стандартные растворы аминопиримидина 500 мкг/мл - раствор N 1.

Стандартный раствор используют для приготовления из него градуировочных растворов. Для этого 25 мг аминопиримидина взвешивают в мерной колбе вместимостью 50 мл на аналитических весах, записывая результат до четвертого знака.

После растворения аминопиримидина в хлористом метилене доводят объем до метки, тщательно перемешивая содержимое колбы, и рассчитывают концентрацию стандартного раствора с учетом чистоты вещества.

Стандартный раствор N 1 используют для приготовления стандартного раствора N 2. Для этого 10 мл раствора N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем до метки хлористым метиленом.

Концентрация раствора N 2 соответствует 50 мкг/мл.

Для приготовления воды с известным содержанием аминопиримидина готовят стандартный раствор N 3. Для этого 1 мл раствора N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем до метки этанолом. Концентрация раствора N 3 соответствует 10 мкг/мл.

Затем, используя стандартный раствор N 2, готовят градуировочные растворы в хлористом метилене:

N 4 - 10 мкг/мл;

N 5 - 20 мкг/мл;

N 6 - 30 мкг/мл;

N 7 - 40 мкг/мл;

N 8 - 50 мкг/мл.

Стандартные растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 месяца при условиях, исключающих испарение раствора.

Способ приготовления градуировочных растворов из стандартного раствора N 2 представлен в таблице 1.

 

Таблица 1

 

Номер     градуировочного раствора	Стандартный раствор N 2 (50 мкг/мл), мл	Растворитель хлористый  метилен, мл	Концентрация    градуиров. раствора, мкг/мл
4	5,00	20,00	10,00
5	10,00	15,00	20,00
6	15,00	10,00	30,00
7	20,00	5,00	40,00
8	25,00	-	50,00

 

2.5.3. Построение градуировочного графика

Для градуировки прибора вводят в хроматограф по 10 мкл каждого градуировочного раствора не менее 3-х раз, измеряют высоту пика линейкой и строят градуировочный график зависимости высоты пика от массовой концентрации аминопиримидина в градуировочном растворе. При данной градуировке необходимо провести измерение коэффициента экстракции аминопиримидина из воды. Коэффициент экстракции определяют по отношению высоты пика аминопиримидина (экстракт из воды с дозированным количеством аминопиримидина - раствор N 3) к высоте пика аминопиримидина градуировочного раствора с той же концентрацией. При использовании градуировочного графика, построенного на основании данных, полученных после экстракции, вводить коэффициент экстракции в расчетную формулу не требуется.

 

2.6. Описание определения

 

2.6.1. Экстракция

500 мл анализируемой воды помещают в делительную воронку вместимостью 1000 мл, насыщают ее NaCl (150 г). Проводят экстракцию 3 x 50 мл хлористым метиленом в течение 1 мин. Объединенные экстракты переносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, фильтруя через бумажный фильтр, смоченный хлористым метиленом. Раствор упаривают порциями в круглодонной колбе вместимостью 50 мл с дефлегматором (10 - 12 см) при температуре бани 60 +/- 5 °C (рис. 1 - не приводится). Затем баню убирают и проводят охлаждение установки до комнатной температуры. Через дефлегматор в колбу наливают 0,5 мл хлористого метилена. Колбу снимают, сушат образец на воздухе досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл хлористого метилена, тщательно ополаскивая стенки колбы. Полученный раствор хроматографируют.

2.6.2. Условия хроматографирования

Анализируемый экстракт, подготовленный, как было изложено выше, в количестве 10 мкл вводят с помощью дозирующего устройства в колонку хроматографа и записывают хроматограмму не менее 3-х раз.

Проводят определение высоты пика и фиксируют среднее из трех определений.

Хроматограмма ацетонового экстракта представлена на рис. 2 (не приводится).

Условия хроматографирования градуировочных растворов и анализируемых проб

    Длина колонки, см                                    6,3

    Внутренний диаметр колонки, мм                       2,0

    Насадка колонки                                      Силосорб-600

                                                         зернением 5 мкм

    Скорость потока элюента через колонку, мкл/мин.      200

    Скорость диаграммной ленты, мм/час                   600

    Диапазон чувствительности                            0,4 - 0,8

    Объем вводимой пробы, мкл                            10

    Объем удерживания, мкл                               1000

    Линейный диапазон определения, нг                    20,0 - 100,0

    Длина волны УФ-детектора, нм                         226

 

2.7. Обработка результатов анализа

 

Перед проведением измерений ежедневно по градуировочному раствору с массовой концентрацией 30,00 мкг/мл проводят коррекцию градуировочной прямой.

Расчет содержания анализируемого вещества в пробе воды проводится по высоте пика методом соотношения со стандартом по формуле:

 

                              C x h x v x K x a

                          X = -----------------,

                                 hгр х V х в

 

где:

X - содержание аминопиримидина, мкг/л;

C - концентрация анализируемого вещества в градуировочном растворе, мкг/мл;

hгр и h - высоты пиков на хроматограммах градуировочного раствора и экстракта, мм;

v - объем экстракта после растворения остатка, мл;

a - объем градуировочного раствора, введенного в хроматограф, мкл;

в - объем пробы экстракта, введенный в хроматограф, мкл;

V - объем пробы воды, взятой для анализа, л;

K - коэффициент, учитывающий потери при концентрировании.

Примечание:

Коэффициент K находят после анализа проб воды, содержащих определенное количество анализируемого вещества по формуле:

 

                                 А внесено

                            K = ------------.

                                А обнаружено

 

3. Требования безопасности

 

При проведении анализов необходимо выполнять правила техники безопасности при работе со стеклом, электрооборудованием, ЛВЖ, кислотами, а также соблюдать правила производственной санитарии и личной гигиены при работе в химической лаборатории.