Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6159-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2-АМИНО-4-ДИМЕТИЛАМИНО-6-ХЛОР-1,3,5-ТРИАЗИНА
В ВОЗДУХЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика вещества
N
// \ C H N Cl.
Cl--C // \ C--NH 5 8 5
│ ││ 2
│ ││ М.м. 173,61.
N \\
/ N
\\ /C
│
N
/ \
H C
CH
3
3
2-Амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазин
(АДХТ) - метаболит и полупродукт синтеза грамекса.
Белое кристаллическое вещество без запаха с Т пл. 210
- 211 °C. Растворимость в воде - 0,049% (25 °C), ацетоне - 1,94%, хлороформе -
0,34%.
ОБУВ для воздуха рабочей зоны 1,5 мг/куб.
м.
2. Методика
измерения концентраций АДХТ
в воздухе рабочей зоны
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на использовании
тонкослойной и газожидкостной хроматографии с применением
пламенно-ионизационного детектора.
Отбор проб проводится с концентрированием
на фильтр, в хлороформ и на полисорб.
2.1.2. Избирательность метода
Измерению не мешают другие триазины - полупродукты производства производных сульфанилмочевин.
2.1.3. Метрологическая характеристика
метода
Нижний предел измерения АДХТ в хроматографируемом объеме пробы 1 мкг (ТСХ) и 0,01 мкг
(ГЖХ).
Нижний предел измерения АДХТ в воздухе
0,01 мг/куб. м.
Диапазон измеряемых концентраций АДХТ в
воздухе от 0,01 до 2 мг/куб. м. Данные по метрологической характеристике
методики представлены в таблице.
Суммарная погрешность измерения не
превышает +/- 2,0%.
Время выполнения измерения, включая отбор
проб, 2 часа (ГЖХ) и 3 часа (ТСХ).
Таблица
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗМЕРЕНИЯ
КОНЦЕНТРАЦИИ
2-АМИНО-4-ДИМЕТИЛАМИНО-6-ХЛОР-1,3,5-ТРИАЗИНА
(АДХТ)
В ВОЗДУХЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
┌─────────┬──────────┬────────────┬───────────────┬───────────────────────┐
│ Метод │ Предел
│ Процент │
Средняя
│ Доверительный │
│измерения│измерения,│определения,│
квадратичная │ интервал (p = 0,95) │
│ │мг/куб. м │ %
│ ошибка │ │
│ │ │ │ определения, │ │
│ │ │ │ мкг
│ │
├─────────┼──────────┼────────────┼───────────────┼───────────────────────┤
│ГЖХ │0,01 │65 │+/- 1,1 │+/- 0,8 (n = 4, m = 4)│
│ │ │ │ │ a
│
├─────────┼──────────┼────────────┼───────────────┼───────────────────────┤
│ТСХ │0,01 │90 │+/- 0,5 │+/- 0,4 (n = 6, m = 4)│
│ │ │ │ │ a │
└─────────┴──────────┴────────────┴───────────────┴───────────────────────┘
2.2. Реактивы,
растворы и материалы
Ацетон чда, ТУ
6-08-3513-75.
Бензол чда,
ГОСТ 5955-75.
Натрий сернокислый б/в, ч, ГОСТ 4106-76.
Этиловый эфир уксусной кислоты чда, ГОСТ 1277-75.
Серебро азотнокислое чда,
ГОСТ 1277-75.
Бромфеноловый синий чда, ТУ
6-09-37-9-83.
Лимонная кислота осч,
ТУ 6-09-584-75.
Силикагель КСК N 2, ГОСТ 3956-76, ТУ
6-09-2523-72.
Силикагель ЛС 5/40 мю для тонкослойной
хроматографии с 13% гипса (Хемапол, ЧССР).
Пластинки для тонкослойной хроматографии
"Силуфол R" (Хемапол,
ЧССР).
Калий иодистый чда, ГОСТ 4232-74.
Крахмал растворимый чда,
ГОСТ 10163-76.
Калий марганцовокислый чда, ГОСТ 20490-75, 3-процентный водный раствор.
Хлористоводородная кислота хч, ГОСТ 18290-72, 12-процентный водный раствор.
Кальций сернокислый чда,
ГОСТ 3210-66.
Кальций хлористый ч,
ГОСТ 4460-77.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Хроматон N-AW, 0,16 - 0,20 мм, с 5% XE-60, промытый кислотой и силанизированный ДМСХ.
Хромосорб W-HP, 80/100 меш, с 3% OV-17.
Полисорб C, 60/100, ТУ 6-05-24-1313-86.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Газовый хроматограф с
пламенно-ионизационным детектором.
Аспирационное устройство, ТУ 64-1-862-77.
Фильтродержатели.
Склянка Дрекселя
вместимостью 250 мл.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ
25-11-917-74.
Аппарат для встряхивания, ТУ
64-1-1081-73.
Водяная баня, ТУ 64-22-603-75.
Электроплитка, ТУ 92-275-76.
Поглотители Зайцева с пористой
пластинкой, ТУ 25-11-1081-75.
Стеклянные концентрационные трубки
(гофрированные).
Стеклянные пластинки, 15 х 15 см.
Сито капроновое, 100/120 меш.
Пульверизатор стеклянный для обработки
пластинок.
Камера для обработки пластинок, ТУ
25-11-430-70.
Камера хроматографическая,
ГОСТ 10565-63.
Эксикатор, ГОСТ 6471-73.
Сушильный шкаф, ТУ 69-1-1411-76.
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10.
Фарфоровая ступка (d = 86), ГОСТ 9147-78.
Стеклянный водоструйный насос, МРТУ
42961-64.
Весы лабораторные ВЛА-200М.
Колбы мерные вместимостью 100 мл, ГОСТ
1770-74
2.4. Отбор пробы
воздуха
Способ 1. Воздух с объемным расходом 2
л/мин. аспирируют через последовательно соединенный
бумажный фильтр "синяя лента" и склянку Дрекселя,
содержащую 70 мл хлороформа и помещенную в охлаждающую смесь льда и хлорида
натрия. Для определения 1/2 ПДК достаточно отобрать 4 л воздуха.
Способ 2. При использовании полисорба для поглощения АДХТ воздух с объемным расходом 3
л/мин. аспирируют через последовательно соединенные фильтродержатель и концентрационную гофрированную трубку из
стекла, содержащую 5 г полисорба.
Пробы можно хранить в холодильнике в
течение двух недель.
2.5. Подготовка к
измерению
2.5.1. Приготовление пластинок с тонким
слоем силикагеля для ТСХ
35 г силикагеля КСК, просеянного через
сито 100/120 меш, смешивают с 2 г сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной
воды в фарфоровой ступке или на аппарате для встряхивания в течение 15 минут.
Около 10 г сорбционной массы наносят на стеклянную пластинку 15 x 15 см и,
покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Пластинки сушат на воздухе в
горизонтальном положении при комнатной температуре 12 часов и затем активируют
в сушильном шкафу при 190 °C в течение 30 минут. Хранят в эксикаторе над слоем
хлористого кальция. При использовании для приготовления пластинок силикагеля ЛС
14 г этого силикагеля смешивают с 38 мл дистиллированной воды. На одну
пластинку наносят 5 - 7 г сорбционной массы и далее поступают так, как это
описано выше.
2.5.2. Приготовление проявляющих
реактивов для ТСХ
Проявляющий реактив N 1:
раствор N 1 - в мерную колбу на 100 мл
помещают 0,25 г йодистого калия и доводят до метки дистиллированной водой;
раствор N 2 - 0,75 г растворимого
крахмала заваривают в 25 мл дистиллированной воды и затем охлаждают;
пластинку обрабатывают смесью (1:1)
растворов N 1 и N 2. Реактив готовят перед употреблением.
Проявляющий реактив N 2:
раствор N 1 - в мерную колбу на 100 мл
помещают 0,4 г бромфенолового синего и доводят до
метки дистиллированной водой;
раствор N 2 - в мерную колбу на 100 мл
помещают 2 г азотнокислого серебра и доводят до метки дистиллированной водой;
пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов N 1 и N 2 и затем 4-процентным
водным раствором лимонной кислоты.
Проявляющие растворы при
хранении в плотно закрытых склянках без доступа света годны для применения в
течение месяца.
2.5.3. Приготовление стандартного
раствора
Стандартный раствор АДХТ в ацетоне с
содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 10,0 мг вещества в мерной колбе на
100 мл.
2.5.4. Приготовление хроматографической
колонки
Стеклянную спиральную хроматографическую
колонку (длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм) заполняют хромосорбом
W-HP с 3% OV-17 под вакуумом и кондиционируют при 180 °C в течение 8 - 10 часов
в токе азота.
2.5.5. Построение градуировочного
графика для определения АДХТ методом ГЖХ
Количественный анализ с помощью газовой
хроматографии АДХТ проводят методом абсолютной калибровки. Для этого градуировочные растворы с содержанием АДХТ 3, 4, 10 и 15
мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора ацетоном. Градуировочные растворы устойчивы в течение месяца при
хранении в холодильнике.
2 мкл каждого градуировочного раствора
вводят в хроматограф
и
хроматографируют при
следующих условиях (хроматограф
"Цвет-106" с
пламенно-ионизационным
детектором): температура термостата колонок 150 °C,
температура термостата
испарителя 260 °C, скорость потока газа-носителя
-12
(азот особой
чистоты) 40 мл/мин.,
шкала электрометра 10 x 10 А,
скорость
диаграммной ленты потенциометра 240 мм/час. Время удерживания АДХТ
в этих условиях
6 мин.
Хроматографирование одного стандартного раствора производят трижды. Измеряют на хроматограммах высоты пика (мм) АДХТ
и строят график зависимости высоты пика АДХТ от его концентрации (мкг/мл).
Полученные данные обрабатывают по методу наименьших квадратов и получают
уравнение калибровочного графика в виде:
H = A + B x X,
где:
H - высота пика АДХТ на хроматограмме, мм;
X - содержание АДХТ в ацетоне, мкг/мл;
A и B - коэффициенты, которые получают
при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.
2.6. Описание
измерения
2.6.1. Измерение АДХТ с помощью
тонкослойной хроматографии
При
отборе пробы воздуха
по способу 1
фильтр извлекают из
фильтродержателя, переносят в стакан на 100 мл, заливают 30
мл хлороформа и
оставляют на
10 минут, периодически перемешивая
стеклянной палочкой.
Хлороформ сливают
в круглодонную колбу
со шлифом на 250 мл через слой
безводного сульфата
натрия (10 г),
помещенного в воронку,
а фильтр
промывают двумя
порциями хлороформа по 10 мл, сливая эти порции и хлороформ
из склянки
Дрекселя
в ту же колбу, упаривают растворитель на ротационном
испарителе при температуре
водяной бани 45 °C до объема ~ 1
мл. Остаток
количественно наносят
на хроматографическую пластинку
с тонким слоем
силикагеля (могут быть
использованы пластинки, приготовленные в
лабораторных условиях, и пластинки
"Силуфол R"). На
эту же пластинку
наносят
стандартные количества (1 и 2 мкг) АДХТ в виде раствора в ацетоне и
проводят хроматографирование в системе растворителей этилацетат -
хлороформ
(1:1) в хроматографической
камере, насыщенной в течение 2 часов парами
подвижных растворителей. Для
насыщения стенки камеры
обкладываются
фильтровальной бумагой,
которая пропитывается смесью
подвижных
растворителей. После
окончания процесса хроматографирования пластинку
извлекают из
камеры и сушат на воздухе в
вытяжном шкафу. Для обнаружения
АДХТ пластинку обрабатывают смесью N 1 и N 2 (1:1)
проявляющего реактива N
2 и
затем 4-процентным водным
раствором лимонной кислоты.
АДХТ
обнаруживается в
виде синих пятен
на желтом фоне с величиной R =
0,61
f
+/- 0,05.
Для
повышения надежности
идентификации АДХТ хроматографирование может
быть также проведено в
системе растворителей ацетон - бензол (3:2). Для
обнаружения АДХТ пластинку
предварительно помещают в эксикатор (камера для
хлорирования) на
2 минуты, на дне которого
наливают смесь (1:1)
3-процентного
водного раствора марганцовокислого калия
и 12-процентного
водного раствора хлористоводородной кислоты (камера насыщается
парами хлора
через 5 - 10
минут после помещения в нее растворов марганцовокислого калия
и
хлористоводородной кислоты). Затем пластинку
вынимают из эксикатора,
помещают в
вытяжной шкаф на 40 минут
для удаления паров
хлора и
обрабатывают проявляющим
реактивом N 1. АДХТ
обнаруживается в виде синих
пятен на светло-голубом фоне
с величиной R = 0,82 +/- 0,05 (пластинки
f
"Силуфол R").
При отборе пробы
воздуха по способу 2 полисорб из концентрационной
гофрированной трубки из стекла помещают в бюретку на 25 мл (диаметр 10 мм) с
краном на конце и АДХТ элюируют 60 мл ацетона со
скоростью 1 - 2 мл/мин. Элюат сушат над безводным
сульфатом натрия (5 - 10 г) в течение 0,5 - 1,0 часа при периодическом
помешивании, удаляют растворитель на ротационном испарителе до объема ~ 1 мл и далее
поступают так, как описано выше.
2.6.2. Измерение АДХТ с помощью
газожидкостной хроматографии
Подготовка проб для измерения проводится
так же, как это описано для тонкослойной хроматографии (п. 2.6.1).
При отборе пробы воздуха по способу 1
объединенный хлороформный раствор сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10
г) в течение 0,5 - 1,0 часа при периодическом перемешивании и удаляют
растворитель на ротационном испарителе при температуре водяной бани 45 °C до
объема ~ 0,5 мл. Остаток растворителя током теплого воздуха удаляют досуха и сухой остаток количественно переносят ацетоном (~ 1
мл) в градуировочную центрифужную
пробирку на 10 мл. Током теплого воздуха упаривают содержимое пробирки до 0,2
мл и 2 мкл вводят в хроматограф. Хроматографирование
одной пробы проводят дважды, измеряют среднее значение высоты пика АДХТ и по
калибровочному графику находят содержание АДХТ. При отборе пробы воздуха по
способу 2 остаток ацетона (~ 1 мл) из круглодонной колбы на 250 мл
количественно переносят в градуировочную центрифужную пробирку на 10 мл и током теплого воздуха
упаривают содержимое до 0,2 мл. 2 мкл ацетонового
раствора вводят в хроматограф и далее поступают так, как это описано выше.
2.7. Обработка
результатов анализа
2.7.1. Метод ТСХ
Концентрацию АДХТ в воздухе C в мг/куб. м
при измерении с помощью тонкослойной хроматографии вычисляют по формуле:
3
A x 10
C = -------,
V
20
где:
A - количество АДХТ в анализируемом объеме
пробы, мг;
V - объем воздуха, отобранный
для анализа и приведенный к стандартным
20
условиям, л.
Приведение
объема воздуха к стандартным условиям проводят по следующей
формуле:
V x (273 + 20) x P
t
V = -------------------,
20 (273 + t) x 101,33
где:
V -
объем воздуха, отобранный для анализа, л;
t
P - барометрическое давление, кПа (101,33
кПа = 760 мм рт. ст.);
t - температура воздуха в месте отбора
пробы, °C.
Количественную оценку АДХТ на хроматограммах проводят путем сравнения интенсивности
окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов АДХТ или по величине
площади пятен по формуле:
A
- A
2 1
A = A - ------- x (S - S),
2 S - S 2
2 1
где:
A, S - количество (мкг) и площадь (кв. мм) пятна
АДХТ в анализируемой
пробе;
A ,
A , S , S - количество (мкг) и
площадь (кв. мм) пятен стандартных
1
2 1 2
растворов АДХТ с
большим и меньшим содержанием по сравнению с анализируемой
пробой.
Величину площади пятен определяют,
накладывая на пластинку прозрачную бумагу или кальку, - очерчивают контур
пятна, переносят его на миллиметровку и подсчитывают число кв. мм, входящих в
контур.
2.7.2. Метод ГЖХ
Концентрацию АДХТ в воздухе C в мг/куб. м
при измерении газожидкостной хроматографией вычисляют по формуле:
3
(H - A) x 10 x V
C =
-----------------,
B x V
20
где:
H - высота пика АДХТ на хроматограмме анализируемой пробы, мм
(среднее значение из двух параллельных определений);
V - общий объем ацетонового раствора
пробы АДХТ, мл;
A и B - коэффициенты, которые получают
при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.
3. Требования
безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
рекомендуемые при работе в химических лабораториях.