Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6176-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФЕНОКСИКАРБА (ИНСЕГАРА) В РАСТИТЕЛЬНОМ
МАТЕРИАЛЕ, ВОДЕ И ПОЧВЕ
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Инсегар - этил-2-(4-феноксифенокси)этилкарбамат.
/\\ /\\
/
\\---O---/ \\
││ │
││ │ C H NO .
││ │
││ │ 17 19 4
\
// \ //---OCH CH NHCOOCH CH .
\// \// 2
2 2 3
М.м. 301,3.
Феноксикарб (инсегар) - кристаллическое вещество, пл.
Т. пл. 53 - 54 °C. Растворим в большинстве органических растворителей, в гексане 5 г/л, в воде при 20 °C 6 ppm.
Не гидролизуется в водном растворе при pH 3,7 и 9 при 35 °C.
-5 -7
Давление пара
при 25 °C - 1,7 x 10 Pa (1,3 x 10 мм рт.
ст.).
2. Методика
определения феноксикарба в растительном
материале, воде и почве методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении феноксикарба из исследуемого объекта ацетоном или
хлороформом и последующем определении методом реакционной газожидкостной
хроматографии в виде ацильного производного.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Нижний предел определения ГЖХ - 0,1 нг, ТСХ - 0,3 мкг.
┌────────────┬───────────────┬───────────┬─────────────┬──────────────────┐
│Исследуемый
│ Предел │
Среднее │ Стандартное │Доверит-й
интервал│
│ объект
│ обнаружения, │
значение │отклонение, %│ сред-го, % │
│ │ мг/кг
│ определ-я │ │ │
├────────────┼───────┬───────┼───────────┼─────────────┼──────────────────┤
│ │ ГЖХ │ ТСХ │ │ │ │
├────────────┼───────┼───────┼───────────┼─────────────┼──────────────────┤
│Растительный│0,005 │0,01
│89,2 │4,5 │+/- 4,49 │
│материал │ │ │ │ │ │
│Почва │0,001 │0,006
│90,3 │4,99 │+/- 4,95 │
│Вода │0,001 │0,001
│90,5 │4,5 │+/- 7,51 │
└────────────┴───────┴───────┴───────────┴─────────────┴──────────────────┘
2.1.3. Условия концентрации, очистки и
последующего газохроматографического определения феноксикарба
позволяют избирательно определять препарат в присутствии ФОС, пиретроидов.
2.2. Реактивы и
материалы
Ацетон, осч, ТУ
3513-86.
Хлороформ, хч,
ГОСТ 20015-74.
Бензол, хч,
ГОСТ 5955-81.
Трифторуксусный ангидрид, ТУ
6-09-4135-75.
Пиридин, ч, ГОСТ
13647-78.
Сульфат натрия, безводный, ч, ГОСТ 4166-76.
Азот в баллоне, особой чистоты, ГОСТ
9293-74.
Неподвижная фаза 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS.
о-Толидин, ТУ
6-09-2232-75, 1-процентный раствор в ацетоне.
Уголь активированный, марки ОУ-"А".
Уксусная кислота, чда,
ледяная, ГОСТ 61-75.
Калий марганцевокислый,
чда, ГОСТ 20490-75.
Кислота соляная, хч,
ГОСТ 4232-74.
Проявляющий реактив: 1% раствор о-толидина в ацетоне.
Основной стандартный раствор (ОСР) феноксикарба с концентрацией 100 мкг/мл готовят взятием
навески 10 мг (0,0100 г) хч и растворением в ацетоне
в мерной колбе емкостью 100 мл. Хранить в холодильнике в течение 2-х месяцев.
Рабочие стандартные растворы с содержанием
10 мкг/мл, 1 мкг/мл, 0,5 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением ОСР
ацетоном.
Хранить в холодильнике в течение 2-х
месяцев.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Газовый хроматограф серии
"Цвет" с ДПР.
Колонки стеклянные длиной 1 м, диаметр
3,5 мм.
Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ
25-11-917-76.
Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82,
емкостью 500, 250, 100, 50 мл.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью 50,
100 мл.
Пробирки мерные на шлифах, ГОСТ 1770-74,
вместимостью 5 и 10 мл.
Аппарат для встряхивания, ТУ
25-11-917-79.
Колба Бунзена, ГОСТ 25336-82.
Воронка Бюхнера,
ГОСТ 9147-80.
Делительная воронка, ГОСТ 25336-82,
емкостью 500 мл.
Колбы конические, ГОСТ 25336-82, емкостью
500 мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2; 1;
5; 10 мл.
Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ SE-2833.024.
Секундомер СД Спр.
1.2000, ГОСТ 5072-79.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Отбор проб
Отбор, хранение и доставка проб
производятся в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб
сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды
для определения микроколичеств пестицидов",
утвержденными Минздравом СССР, N 2057-79 от 21.08.79.
2.4.2. Подготовка колонки для ГЖХ
Колонку заполняют стандартной фазой (5%
SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS), подключив ее к вакууму
водоструйного насоса. Заполненную колонку кондиционируют в термостате колонок в
течение 6 часов без подключения к детектору, продувая азотом (~= 60 мл/мин.) и
постепенно поднимая температуру от 100 °C до 250 °C. Затем колонку присоединяют
к детектору.
2.4.3. Приготовление камеры для хроматографирования
На
дно эксикатора помещают
чашку Петри с 3 - 5 г KMnO и
4
добавляют туда 8
- 10 мл концентрированной HCl.
Через 3 - 4 мин.
камера готова
для проведения хлорирования.
2.5. Описание
определения
2.5.1. Экстракция, очистка и получение ацильного производного феноксикарба
Почва. I. 50 г анализируемой пробы
помещают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл, заливают 100 мл ацетона и 5 - 10
мл воды. Смесь перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 1 час., фильтруют на воронке Бюхнера с
фильтром "синяя лента". Фильтрат сушат безводным сульфатом натрия и
упаривают в вакууме водоструйного насоса досуха. К сухому остатку прибавляют 2
мл смеси ацетон:бензол (3:1)
и 0,1 г угля марки ОУ-"А", встряхивают в течение 3 - 5 мин. Фильтрат
упаривают в вакууме водоструйного насоса при температуре водяной бани 50 °C
досуха. К сухому остатку прибавляют 100 мкл
трифторуксусного ангидрида, 20 мкл пиридина.
Выдерживают реакционную смесь в течение ~ 40 мин., затем к ней прибавляют 1 мл
бензола и 5 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение ~ 2-х мин. После
разделения фаз проводят хроматографический анализ бензольного верхнего слоя.
II. 50 г анализируемой пробы помещают в
плоскодонную колбу емкостью 500 мл, заливают 100 мл хлороформа и 15 - 20 мл
воды. Смесь перемешивают на аппарате для встряхивания в течение ~ 1 час., после чего фильтруют на воронке Бюхнера.
Фильтрат разделяют в делительной воронке. Нижний слой хлороформа сушат
безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме водоструйного насоса досуха
при температуре бани 60 °C. Дальше - как I вариант.
Растительный материал. Вариант I. 25 г
измельченных плодов помещают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл, заливают 100
мл ацетона и 10 мл воды. Смесь перемешивают на аппарате для встряхивания в
течение 1 часа, затем фильтруют на воронке Бюхнера с
бумажным фильтром "синяя лента". Фильтрат сушат безводным сульфатом
натрия и затем упаривают в вакууме водоструйного насоса досуха. К сухому
остатку прибавляют 2 мл смеси ацетон - бензол (3:1) и 0,1 г активированного
угля марки ОУ-"А", встряхивают в течение 3 -
5 мин. Фильтруют через бумажный фильтр, тщательно промывая 30 мл смеси ацетон -
бензол (3:1). Фильтрат упаривают в вакууме водоструйного насоса при температуре
водяной бани 50 °C досуха. К сухому остатку прибавляют 100 мкл
трифторуксусного ангидрида, 20 мкл пиридина сухого.
Реакционную смесь выдерживают в течение ~ 40 мин., затем к ней прибавляют 1 мл
бензола и 5 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение 2-х минут. После
разделения фаз проводят хроматографический анализ бензольного верхнего слоя.
II вариант - аналогично подготовке
анализируемого образца почвы.
Вода. 200 мл анализируемой пробы воды
помещают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл, заливают 100 мл хлороформа.
Смесь перемешивают на аппарате для встряхивания в течение ~ 1 часа, затем
отделяют в делительной воронке нижний слой хлороформа. Его сушат безводным
сульфатом натрия и упаривают в вакууме водоструйного насоса досуха при
температуре бани 60 °C. К сухому остатку прибавляют 100 мкл
трифторуксусного ангидрида, 20 мкл пиридина.
Реакционную смесь выдерживают в течение ~ 40 минут, затем к ней прибавляют 10
мл бензола и 5 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение ~ 2-х мин. После
разделения фаз проводят хроматографический анализ
верхнего бензольного слоя.
2.5.2. Хроматографический
анализ
Газовый хроматограф серии
"Цвет" с ДПР.
Колонка хроматографическая
стеклянная 1 м с внутренним диаметром 3,5 мм. Неподвижная фаза 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS.
Температура колонки - 220 °C.
Температура испарителя - 250 °C.
Температура детектора - 270 °C.
Газ-носитель - азот с расходом 65 - 70
мл/мин.
Вводимый объем - 3 мкл.
12
Шкала множителя - 20 x 10 .
Скорость диаграммной ленты - 600 мм/час.
Время удерживания - 2,20 мин.
Количественную оценку проводят методом
соотношения со стандартом феноксикарба, из которого
получено ацильное производное,
по схеме, указанной для рабочих проб.
Расчет результатов анализа проводят по
формуле:
C x H x V
x V
2 1
3
X = ----------------,
H x V
x P
1 2
где:
X
- содержание феноксикарба в
анализируемой пробе, мг/кг,
мг/л;
C
- концентрация стандартного раствора для ГЖХ, вводимого в
хроматограф,
мкг/мл;
H -
высота пика стандартного раствора, мм;
1
H -
высота пика пробы, мм;
2
V -
объем анализируемого экстракта пробы, мл;
1
V -
объем стандартного ацилированного раствора,
введенного в
2
хроматограф, мкл;
V -
объем ацилированной пробы, введенный в хроматограф, мкл;
3
P - навеска анализируемой пробы, г.
2.5.3. Метод тонкослойной хроматографии
Пробу, сконцентрированную до 0,5 мл, количественно
переносят
на пластинку
"Силуфол".
Параллельно наносят серию стандартных
растворов с
содержанием 0,3; 0,5; 1,0 мкг
действующего вещества
феноксикарба. Хроматографируют
в системе растворителей
гексан:атилацетат:уксусная кислота
(66:35:1). После высушивания
пластинку помещают на 1 - 2 с в камеру с хлором. Затем
пластинку
вынимают из
камеры и оставляют на воздухе до исчезновения запаха
хлора. После
обработки пластинки 1-процентным раствором о-толидина
в ацетоне феноксикарб проявляется
в виде голубых пятен на белом
фоне, при нагревании пластинки в сушильном шкафу
при 60 - 80 °C в
течение 20
мин. цвет пятен изменяется. Феноксикарб
проявляется в
виде коричневых пятен на горчичном фоне. R = 0,42 +/- 0,04.
f
Содержание инсегара
в исследуемой пробе вычисляют по формуле:
A
X = - мг/кг (мг/л),
P
где:
A - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
P - навеска пробы в мл.
3. Техника
безопасности
Соблюдать все необходимые требования
безопасности при работе в химических лабораториях, а также Правила устройства,
техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического
режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах
санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР, N 2455-81 от 20.10.81.