Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6225-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО УСКОРЕННОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ СЕВИНА В
ПОЧВЕ И
РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ АДСОРБЦИОННОЙ
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ
ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Карбарил (севин) - альфа-нафтил-N-метилкарбомат - инсектицид сильного контактного и частично
кишечного действия. Рекомендуется для опрыскивания кукурузы, хлопчатника,
яблони, картофеля.
OCONHCH
3
│
//\
/\\
//
\/ \\
│
││ │
\\
/\ //
\\/
\//
Эмпирическая формула C H O N.
Молекулярная масса 201,14. Это
12 11 2
белое кристаллическое вещество с Т. пл. 142 °C,
плохо растворим в
воде, хорошо - в
большинстве органических растворителей.
Выпускается в форме 85% смачивающегося
порошка.
Среднетоксичен. ЛД
для крыс - 721, для мышей - 275
мг/кг.
50
Очень опасен для
пчел и полезных насекомых. Стойкий препарат. В
почве сохраняется
в течение года. Остатки в сельскохозяйственной
продукции не
допускаются.
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на извлечении карбарила из пробы органическим растворителем, очистке и
концентрировании экстракта, селективном определении карбарила
методом ВЭЖХ на неподвижной фазе "Силасорб
600" в потоке элюента н-гексан - ацетон в
объемном соотношении 3:1 при 222 нм.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Линейный диапазон измерения 5 - 100 нг.
Нижний предел определения севина в почве и растительном материале - 0,005 и 0,0125
мг/кг. Среднее значение определения 85,95%. Объем удерживания севина - 415 мкл.
Методика обеспечивает селективный
количественный анализ препарата в присутствии глобальных загрязнителей
окружающей среды, таких как ДДТ, ГХЦГ, 2,4-Д и другие ХОС, их метаболитов (полихлорированные фенолы и бензолы), азот- и
фосфорорганических пестицидов, хроматографические
зоны которых расположены до выходного сигнала карбарила.
2.2. Реактивы и
растворы
Азот (особой чистоты), ГОСТ 9293-74.
Аммоний хлорид, хч,
ГОСТ 3765-78.
Ацетон, ч, ГОСТ
2603-79.
н-Гексан, ч,
ГОСТ 6-09-3375-78.
Спирт метиловый, хч,
ГОСТ 6995-77.
Натрия сульфат, безводный, хч, ГОСТ 1277-81.
Натрия хлорид, хч,
ГОСТ 4233-77.
Силасорб 600, 5 мкм (ЧССР).
Фильтры ФПП-ХА или АФА-ХА-20.
Эфир петролейный,
ч, ГОСТ 11992-77.
2-процентный раствор аммония хлорида (2 г
аммония хлорида растворяют в 98 мл дистиллированной воды).
Стандартный раствор карбарила
в н-гексане с массовой долей 10 мкг/мл.
Раствор элюента н-гексан
- ацетон в объемном соотношении 3:1.
2.3. Приборы,
посуда, материалы
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с, ТУ
64-1-2451-78.
Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ
24104-80.
Весы технические ВЛТК-500, ГОСТ 24104-80.
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.
Испаритель ротационный типа ИР-1М, ТУ
25-11-917-76.
Установка компрессорная, ТУ 64-12986-78.
Хроматограф жидкостный микроколоночный серии "Милихром"
со спектрофотометрическим детектором.
Фильтродержатели.
Электроаспиратор ЭА-30.
Воронки делительные, ГОСТ 25336-82.
Колбы конические на 50, 100, 250 мл, ГОСТ
25336-82.
Колбы грушевидные на шлифе, ГОСТ
25336-82.
Колбы мерные на 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Микропипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.
Пипетки мерные на 1; 5; 10 мл, ГОСТ
20292-74.
Пробирки мерные на шлифе, ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74.
2.3. Отбор,
хранение и подготовка проб к анализу
Отбор, хранение и подготовка проб к
анализу проводятся в соответствии с "Унифицированными правилами отбора
проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов внешней среды
для определения микроколичеств пестицидов",
утвержденными Минздравом СССР за N 2051-79 от 21.08.1979.
2.4. Проведение
определения
2.4.1. Экстракция препарата из
анализируемой пробы
Навеску среднего образца воздушно-сухой
пробы почвы, измельченной и просеянной через сито с диаметром отверстий 1 меш,
массой 50 г или средней измельченной пробы растительного материала массой 20 г,
взятую на технических весах, помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, туда же
проливают 100 мл н-гексана. Колбу закрывают пробкой и
помещают на аппарат для встряхивания на 1 ч, затем гексановый
экстракт сливают через воронку с безводным сульфатом натрия в колбу для
упаривания. К пробе приливают еще 50 мл н-гексана и
экстракцию повторяют в течение 15 мин. Гексановый
экстракт присоединяют к первой порции. Объединенный гексановый
раствор пробы упаривают на ротационном испарителе при 50 - 60 °C досуха. Сухой
остаток растворяют в 10 мл метанола, добавляют 10 мл 2-процентного водного
раствора хлорида аммония. Содержимое колбы перемешивают и помещают в
морозильную камеру на 25 - 30 мин. После вымораживания пробы к ней добавляют 10
мл петролейного эфира и 3 г хлорида натрия.
Содержимое колбы взбалтывают в течение 2 мин. и переносят в делительную воронку
на 150 мл. Очистку водно-метанольного раствора пробы петролейным эфиром повторяют еще 2 раза, беря по 10 мл
растворителя. Из водно-метанольного раствора карбарил трижды извлекают н-гексаном,
беря по 10 мл. Объединенный гексановый экстракт
высушивают безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе при
50 - 60 °C до 2 мл. Остаток пробы переносят в мерную пробирку и концентрируют
до 0,5 мл в токе азота (особой чистоты).
После окончания подготовки проб и их
концентрирования приступают к хроматографическому
определению карбарила методом ВЭЖХ со
спектрофотометрическим детектированием.
2.4.2. Хроматографическое
определение методом адсорбционной ВЭЖХ
Сухой остаток пробы растворяют в 0,5 мл
н-гексана. Из полученного раствора
отбирают 0,5 - 10 мкл анализируемой пробы и вводят в
жидкостный микроколоночный хроматограф со
спектрофотометрическим детектором (хроматограф типа "Милихром")
и измеряют массовую долю севина в исследуемых пробах
при следующих условиях режима хроматографического
анализа: неподвижная фаза - "Силасорб 600",
5 мкм, подвижная фаза - смесь н-гексан - ацетон в
объемном соотношении 3:1, скорость элюирующего потока
200 мкл/мин.; длина волны поглощения светового
потока 222 нм, поддиапазон чувствительности 1,6 А, время измерения выходных сигналов 0,6 с; скорость
движения диаграммной ленты 720 мм/ч. При этих условиях анализа объем
удерживания карбарила составляет 415 мкл.
Для идентификации выходных сигналов севина в пробах и расчета концентраций препарата в них
проводится градуировка стандартным раствором с массовой долей севина в н-гексане 10 мкг/мл. В
хроматограф вводят 0,5; 1; 3; 5; 7 и 10 мкл раствора,
количественное содержание препарата в котором соответствует 5; 10; 30; 50; 70;
100 нг. Между высотой выходных сигналов и массовой
долей севина в стандартном гексановом
растворе сохраняется прямолинейная зависимость во всем диапазоне измеряемых
концентраций.
2.5. Обработка
результатов
Расчет содержания севина
в пробах проводят по формуле:
A x h x V
2
X (мг/кг) = -----------,
h x V x
P
1 1
где:
A
- концентрация стандарта севина,
введенная в хроматограф,
нг;
h -
высота выходного сигнала стандарта, мм;
1
h -
высота выходного сигнала пробы, мм;
2
V - объем раствора пробы, используемого для
анализа, мл;
V -
объем пробы, введенный в хроматограф, мкл;
1
P - навеска пробы, используемой для
анализа, г.
3. Требования
безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила
безопасности при работе с токсическими веществами, органическими
растворителями, кислотами и щелочами, а также электрооборудованием.