Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6255-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИАФЕНТИУРОНА (ПЕГАСА) В ВОДЕ, ПОЧВЕ,
ЦИТРУСОВЫХ, СЕМЕНАХ ХЛОПЧАТНИКА
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Диафентиурон (пегас CGA 106630) - препарат производства фирмы "СибаГейги", кристаллическое вещество белого цвета,
хорошо растворим в ацетонитриле.
H C CH
3 3
\/
C-H
/
/\\ O /\\
/ H C CH
/ \\/
\/ \\/ S
3 3
││ │ ││ │
\\ \ / М.м. 384,59.
\ // \
//\ C C
\// \// \ / \ / \
│ N N CH
H C-CH │
│ 3
3 │
H H
CH
3
Рекомендован как несистемный инсектоакарицид. Легко разрушается под действием солнечного
света. Рекомендуется хранить в закрытой таре при температуре не выше 5 °C.
2. Определение диафентиурона в воде, почве, цитрусовых,
семенах хлопчатника методами газовой
и тонкослойной
хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на определении диафентиурона газожидкостной и тонкослойной хроматографией
после извлечения из анализируемой пробы органическим растворителем.
Тонкослойная хроматография проводится в тонком слое силикагеля.
Газохроматографическое определение проводится на макрокапиллярной
колонке либо на набивной колонке в виде гептафторпроизводного.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Диапазон определяемых концентраций - 0,01
мг/л для воды; 0,03 мг/кг - для почвы, растений.
┌─────────────┬─────────────┬────────────┬─────────────┬────────────────────┐
│Анализируемый│ Размах
│ Среднее │Относительное│ Доверительный │
│ объект
│варьирования,│
значение │ стандартное │интервал
среднего, %│
│ │ %
│определения,│ откл., % │ n = 5, P = 0,95 │
│ │ │ %
│ │ │
├─────────────┼─────────────┼────────────┼─────────────┼────────────────────┤
│Вода │85,7 - 90,5 │87,5 │+/- 4,2 │+/- 4,6 │
│Почва │80,1 - 85,3 │82,6 │+/- 5,7 │+/- 7,9 │
│Лимоны │77,1 - 86,0 │84,3 │+/- 5,8 │+/- 7,8 │
│Семена
│75,0 - 85,0 │80,7 │+/- 5,9 │+/- 8,0 │
│хлопчатника │ │ │ │ │
└─────────────┴─────────────┴────────────┴─────────────┴────────────────────┘
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, хч,
ГОСТ 2603-79.
н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Сульфат натрия безводный, ГОСТ 4166-76.
Хлороформ, ч,
ГОСТ 20015-74.
Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-87.
Оксид алюминия II ст. акт., ч, МРТУ 6-09-5296-68.
Приготовление стандартных растворов диафентиурона
Стандартный раствор, содержащий 1000
мкг/мл вещества, готовят растворением 50 г препарата в мерной колбе на 50 мл в ацетонитриле (ацетоне). Исходный основной раствор можно
хранить в холодильнике в течение 2-х недель.
Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением
исходного основного раствора. Рабочие растворы хранят не более 2-х суток
(препарат разлагается на свету).
Получение фторпроизводного диафентиурона с концентрацией 1 мкг/мл: 10 мкл основного стандартного раствора, содержащего 10 мкг
вещества, переносят в мерную пробирку, прибавляют 10 мкл
гептафтормасляного ангидрида и оставляют на 1 час. По
истечении этого времени избыток реагентов отдувают в токе сжатого воздуха.
Сухой остаток разбавляют в 10 мл гексана.
К методу ГЖХ
Гептафтормасляный ангидрид, ч, ТУ 6-09-40-2571-87.
Азот газообразный, ГОСТ 9293-74.
Хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.
К методу ТСХ
Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-4530-77.
Нитрат серебра, ГОСТ 1277-81.
Лимонная кислота, ГОСТ 908-79,
2-процентный раствор.
Пластинки "Силуфол"
(Хемапол, ЧССР).
Проявляющий реактив: Раствор А: 100 мг бромфенолового синего
растворяют
в 10 мл ацетона.
Раствор Б: 1 г нитрата
серебра
растворяют в 40 мл воды и
прибавляют
120 мл ацетона.
Растворы А и Б
сливают в мерную колбу на 200 мл и доводят ацетоном до метки.
2.3. Приборы,
аппаратура, посуда
Хроматограф "Цвет-106" с ТИД и
ДПР.
Стеклянная макрокапиллярная
колонка с фазой SE-301 с толщиной пленки 2 мкм, диаметром 0,6 мм, длиной 55 м.
Колонка стеклянная 1000 x 3 мм с 5%
SE-30.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ
25-11-917-76.
Аппарат для встряхивания, ТУ
64-21-1087-73.
Микрошприц МШ-10, ТУ 2.833.106.
Посуда лабораторная по ГОСТ 1770-74,
25336-82, 20292-74.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.
2.4. Отбор,
хранение и доставка проб
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем
Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 за N 2051-79.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция
Вода. 500 мл пробы помещают в делительную
воронку и препарат экстрагируют трижды по 30 мл
хлороформа. Отделяют органический слой, сушат безводным сульфатом натрия,
концентрируют до объема 0,3 - 0,5 мл при температуре бани не выше 60 °C. Досуха
удаляют остаток растворителя на воздухе. Далее проводят определение методами
ГЖХ и ТСХ.
Почва, лимоны, семена хлопчатника. 10 г
анализируемой пробы (лимоны и семена хлопчатника измельчают на электромельнице, почву просушивают и просеивают) помещают в
колбу емкостью 500 мл и заливают 150 мл хлороформа. Встряхивают в течение 1,5 -
2 часов. Экстракцию повторяют трижды. Объединенный экстракт сушат безводным
сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе до 1 - 2 мл при
температуре не выше 60 °C.
2.5.2. Очистка экстракта
Упаренный экстракт (1 - 2 мл) вносят в
стеклянную колонку, заполненную 10 г оксида алюминия и 2 - 3 г безводного
сульфата натрия, уплотненных и промытых ацетонитрилом.
Элюируют пробу 200 мл ацетонитрила.
Элюат концентрируют до объема 0,2 - 0,5 мл. Остаток в
колбе растворяют в 50 мл гексана и переносят в
делительную воронку. Прибавляют в делительную воронку 15 мл ацетонитрила,
встряхивают, дают разделиться фазам. Отделяют ацетонитрил,
а к гексану добавляют новые 15 мл ацетонитрила.
Экстракцию повторяют трижды. Объединяют ацетонитрильную фракцию, концентрируют
до объема ~ 0,1 мл. Полностью удаляют растворитель на воздухе. Далее проводят
определение методами ГЖХ и ТСХ.
2.5.3. Определение методом ГЖХ
А. Условия хроматографирования
при определении на макрокапиллярной колонке
Хроматограф "Цвет-106" с
термоионным детектором.
Колонка макрокапиллярная
с фазой SE-301, толщина пленки 2 мкм, диаметр 0,6 мм, длина 55 м.
Температура испарителя - 230 °C.
Температура колонки - 230 °C.
Расход газа-носителя - 30 мл/мин.
Время удерживания - 3,7 мин.
Минимально детектируемое количество - 20 нг.
Б. Условия хроматографирования
при определении в виде фторпроизводного
Пробу после концентрирования переносят
количественно 1 - 2 мл ацетонитрила в пробирку на
шлифе. Удаляют растворитель с помощью сжатого воздуха полностью. К сухому
остатку приливают 0,1 мл ацетонитрила и 10 мкл гептафтормасляного ангидрида,
оставляют на 1 час на воздухе. Затем удаляют избыток реагента струей воздуха
полностью. К сухому остатку приливают 1 мл гексана и аликвоту 3 - 5 мкл вводят в
хроматограф.
Условия хроматографирования
Газовый хроматограф "Цвет-106"
с детектором постоянной скорости рекомбинации.
Носитель - хроматон
N-AW (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.
Колонка стеклянная 1000 x 3 мм.
Скорость газа-носителя - 50 мл/мин.
-12
Шкала электрометра - 20 x 10 А.
Температура колонки - 170 °C.
Температура испарителя - 240 °C.
Температура детектора - 240 °C.
Вводимый объем - 5 мкл.
Линейный диапазон детектирования - 2 - 10
нг.
Время удерживания - 4 мин.
2.6. Обработка
результатов
Содержание диафентиурона
в пробе вычисляют по формуле:
G x h
x V
ст пр общ
X = ----------------,
h x V x
P
ст 1
где:
X - содержание препарата в пробе, мг/кг,
мг/л;
G
- количество стандартного раствора,
введенного в
ст
хроматограф, нг;
h -
высота пика стандартного раствора, мм;
ст
h -
высота пика пегаса в исследуемой пробе, мм;
пр
V -
объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
1
V
- общий объем пробы, мл;
общ
P - навеска пробы, г
(мл).
2.7. Определение
методом ТСХ
Пробу,
сконцентрированную до объема
0,1 - 0,2
мл,
количественно наносят на
пластинку "Силуфол"
(пластинка
предварительно промыта в
ацетоне), смывая остаток
2 - 3 раза
хлороформом.
Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от нижнего
края пластинки.
Справа и слева
от пробы наносят стандартные
растворы
пестицида, содержащие 2, 5, 10 мкг препарата. Пластинку с
нанесенными растворами
помещают в хроматографическую
камеру, в
которую налита
смесь гексан:хлороформ
(1:2). После поднятия фронта
растворителей на
10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько
мин. на воздухе
для испарения подвижного растворителя. После этого
пластинку обрабатывают из пульверизатора раствором бромфенолового
синего, затем обесцвечивают 2-процентным раствором
лимонной
кислоты. Диафентиурон проявляется в виде пятен сине-бурого цвета
на желтом фоне с
R 0,5 +/- 0,05.
f
Количество препарата в пробе определяют
сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартного раствора.
Количество препарата в пробе определяют
по формуле:
A
X = -,
P
где:
X - содержание пегаса в пробе, мг/кг,
мг/л;
A - количество пегаса, найденное в пробе,
мкг;
P - навеска пробы, г
(мл).
2.8. Техника
безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила
безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.