Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6264-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ
2-МЕТИЛ-4-ДИМЕТИЛАМИНОМЕТИЛБЕНЗИМИДАЗОЛ-5-ОЛ-ДИГИДРОХЛОРИДА
В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ КУКУРУЗЫ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Торговое название: Амбиол.
Производитель: Россия.
Действующее вещество: 2-метил-4-диметиламинометилбензимидазол-5-ол-дигидрохлорид.
Структурная формула:
N(CH )
│ 3 2
│
CH
N
HO
/\2 /││
\ // \ / /\
│
││ N \ x 2HCl
│
││──H CH
\\ / 3
\/
Эмпирическая формула C H N O.
11 15 3
Молекулярная масса 278,18.
Физико-химические свойства: белое
кристаллическое вещество с Т пл. 221 - 226 °C.
Растворим в воде, этиловом спирте.
Основание растворимо в хлороформе, этиловом спирте.
МДУ в продуктах питания - не допускается.
ОДУ в воде водоемов - 0,03 мг/куб. дм, ОДК в почве - 0,03 мг/кг.
Применяется в качестве регулятора роста
растений в посевах кукурузы.
2. Методика
определения амбиола в воде, почве,
зерне и зеленой массе кукурузы тонкослойной хроматографией
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на
извлечении амбиола из объектов смесью этилового
спирта с аммиаком в соотношении 50:2, экстракции хлороформом из водного
раствора коэкстрактивных веществ при pH <= 1, препарата - при pH
>= 10 и определении хроматографией в тонком слое на пластинках "Силуфол" в подвижной фазе этиловый спирт: аммиак в
соотношении 30:2 с обнаружением зон локализации обработкой 0,5-процентным
водным раствором нитрита натрия.
2.1.2. Избирательность метода
Метод селективен.
Определению не мешают хлорорганические и фосфорорганические пестициды.
Метрологическая характеристика метода
приведена в таблице.
Таблица
|
|
Значение
метрологических характеристик
|
|
вода
|
почва
|
зеленая масса
|
зерно кукурузы
|
|
Диапазон
измеряемых
концентраций,
мг/кг, л
|
0,002 - 0,2
|
0,003 - 0,8
|
0,02 - 0,8
|
0,008 - 0,8
|
|
Предел
обнаружения, мкг
|
0,2
|
0,2
|
0,5
|
0,2
|
|
Предел
обнаружения,
мг/кг, л
|
0,002
|
0,008
|
0,02
|
0,008
|
|
Среднее значение
определения
стандартных
количеств, %
|
73,0
|
74,0
|
84,0
|
81,0
|
|
Число
параллельных
определений, n
|
6
|
6
|
6
|
6
|
|
Стандартное
отклонение, %
|
2,6
|
3,0
|
4,1
|
4,7
|
|
Доверительный
интервал
среднего при
p = 0,95 и
n = 6, %
|
73,0 +/- 3,9
|
74,0 +/- 4,5
|
84,0 +/- 6,2
|
81,0 +/- 7,0
|
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон чда,
ГОСТ 2603-79.
Спирт этиловый технический, ГОСТ
18300-72, свежеперегнанный.
Хлороформ чда,
ГОСТ 20015-74, свежеперегнанный.
Кислота соляная ч,
ГОСТ 3118-77.
Аммиак водный, ГОСТ 3760-79.
Натрий сернокислый безводный хч, ГОСТ 4166-76.
Натрий уксуснокислый 3-водный, ТУ 199-78.
Натрий азотистокислый
хч, ГОСТ 4197-74.
Натрий хлористый чда,
ГОСТ 4233-77.
Проявляющий реактив - 0,5-процентный
водный раствор азотистокислого натрия.
Пластинки "Силуфол"
производства фирмы "Хемапол", ЧССР размером
150 x 150 мм.
2.3. Приборы и
посуда
Сосуды СЦ-3, ГОСТ 25336-32Е.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74,
или аналогичные.
Аппарат для встряхивания, ТУ
64-1-1081-73, или аналогичный.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М,
ТУ 25-11-917-76, или аналогичный с набором колб.
Воронки делительные, ГОСТ 10054-82,
вместимостью 300 мл.
Колбы плоскодонные, ГОСТ 9737-70,
вместимостью 250 мл.
Колбы Эрленмейера,
ГОСТ 9737-70, вместимостью 250 мл.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью
25 мл.
Пипетки с делениями, ГОСТ 20292-74,
вместимостью 10, 5, 1 мл.
Пробирки градуированные с пробками на шлифах, ТУ 1770-74Е.
Мельница лабораторная (кофемолка).
Сушильный шкаф.
2.4. Отбор проб
Отбор проб проводится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными 21.08.1979 N
2051-79.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка хроматографической
камеры
Хроматографические камеры за 1 час до начала хроматографирования
заполняют подвижными фазами: первую - ацетоном, вторую, стенки которой обложены
фильтровальной бумагой, - смесью этиловый спирт:аммиак в соотношении 30:2. Объем подвижной фазы в
камере должен находиться на высоте не выше чем 0,7 - 1,0 см от уровня дна
камеры.
2.5.2. Приготовление стандартных
растворов
Стандартный раствор N 1 амбиола концентрации 1 мг/мл готовят растворением навески
0,0250 г в 25 мл этилового спирта в мерной колбе.
Стандартный раствор N 2 амбиола концентрации 0,1 мг/мл готовят разбавлением 5 мл
стандартного раствора N 1 до 50 мл этиловым спиртом в мерной колбе.
2.6. Проведение
определения
2.6.1. Экстракция и очистка экстракта
2.6.1.1. Вода. Пробу воды (100 мл),
насыщенную хлористым натрием (30 г), помещают в делительную воронку, приливают
3 мл 1 N раствора соляной кислоты и экстрагируют трижды хлороформом порциями по
10 мл. Хлороформ отбрасывают. К водному слою приливают 5 мл водного аммиака и
экстрагируют амбиол тремя порциями хлороформа по 50
мл. Хлороформные экстракты объединяют, промывают 10 мл воды, пропускают через
слой безводного сернокислого натрия, помещенного на фильтровальную бумагу в
коническую воронку. Фильтрат концентрируют на ротационном испарителе до объема
1 - 2 мл, затем в токе воздуха до объема 0,3 - 0,5 мл и всю пробу наносят на
пластинку. Колбу обмывают двумя мл хлороформа, который концентрируют в токе
воздуха до объема ~ 0,3 - 0,5 мл, и этот объем также наносят на пластинку в то
же пятно.
2.6.1.2. Почва, зерно и зеленая масса
кукурузы. Навеску пробы (25 г) экстрагируют трижды смесью этанол:аммиак в соотношении 50:2 мл на механическом встряхивателе в течение 30; 15; 15 мин. Экстракты фильтруют
под вакуумом через бумажный фильтр в конической воронке, концентрируют на
ротационном испарителе до объема 0,5 - 1 мл, затем в токе воздуха до отсутствия
запаха этилового спирта. К остатку приливают 20 мл дистиллированной воды, 3 мл
1 N раствора соляной кислоты и фильтруют через бумажный фильтр. Колбу и фильтр
промывают 5 мл дистиллированной воды. К фильтрату приливают 1 мл этилового
спирта и экстрагируют 5 раз хлороформом порциями по 5 мл. Хлороформный экстракт
отбрасывают. К водному слою приливают 5 мл водного аммиака (pH
не менее 10) и экстрагируют четырьмя порциями хлороформа по 20 мл.
Объединенный хлороформный экстракт
промывают тремя порциями по 5 мл насыщенного водного раствора хлористого
натрия, пропускают через слой безводного сернокислого натрия в конической
воронке и концентрируют на ротационном испарителе до объема 1 мл, затем в токе
воздуха до ~ 0,3 - 0,5 мл. Остаток с помощью капилляра наносят на пластинку.
Колбу дважды обмывают 2 мл хлороформа, который после концентрирования в токе
воздуха до 0,3 - 0,5 мл также наносят на пластинку.
2.6.2. Условия хроматографирования
На пластинки с нанесенными пробами на
расстоянии 15 мм друг от друга наносят серию стандартных растворов амбиола, содержащих 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 и 20,0
мкг. Для этого в семь пробирок вносят 2; 5; 10 мл стандартного раствора N 2 и
наносят в хлороформе, как описано для проб.
Хроматограмму развивают
в системе N
1 до тех
пор, пока фронт
растворителя не
поднимется на всю
высоту 10 см. После развития в
двух
системах пластинку подсушивают
при температуре 60 - 80 °C и обрабатывают
проявляющим реактивом.
Амбиол проявляется в виде желто-оранжевых
пятен на
светлом фоне с R 0,30 +/-
0,03. Окраски пятен и фона устойчивы.
f
2.7. Обработка
результатов анализа
Количественное определение амбиола в анализируемой пробе проводят путем сравнения
площадей и интенсивности пятен пробы и серии стандартов.
Содержание амбиола
в пробе (X) в мг/кг или мг/л вычисляют по формуле [KL1]:
A
X = -,
P
где:
A - количество вещества, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;
P - навеска анализируемой пробы в г или объем анализируемой воды в мл.
3. Требования
безопасности
Соблюдать все необходимые требования
безопасности работы в химических лабораториях, Правила устройства, техники
безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной
гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах
санитарно-эпидемиологических учреждениях системы Минздрава СССР, N 2455-81 от
20.10.1981, а также соблюдать правила безопасности, принятые для работы с
легковоспламеняющимися жидкостями и пестицидами.