МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР
ПРИКАЗ
от 23 декабря 1967 г. N 980
В соответствии с представлением
Управления по внедрению новых лекарственных средств и медицинской техники и
Главного управления лечебно-профилактической помощи детям и матерям приказываю:
1. Внедрить в практику
лечебно-профилактических учреждений экспресс-метод определения резус-фактора,
одобренный Комитетом по новой медицинской технике.
2. Министрам здравоохранения союзных и
автономных республик, заведующим краевыми и областными отделами
здравоохранения:
а) организовать силами и средствами
службы крови заготовку универсальной (AB(IV) группы крови) сыворотки антирезус для приготовления тестового реактива по
определению резус-фактора на плоскости;
б) обязать директоров республиканских
институтов гематологии и переливания крови, главных врачей республиканских,
краевых, областных и городских станций переливания крови, а также заведующих
крупными (категорированными) отделениями переливания крови:
- обеспечить бесперебойное снабжение
лечебно-профилактических учреждений на обслуживаемой территории универсальной
сывороткой для определения резус-фактора на плоскости, руководствуясь
Инструкцией по приготовлению сывороток для определения резус-фактора на
плоскости без подогрева (Приложение N 1);
- организовать инструктаж врачей
лечебно-профилактических учреждений по применению экспресс-метода определения
резус-фактора на плоскости и установить контроль за
использованием противорезусных сывороток;
в) обязать главных врачей
лечебно-профилактических учреждений в течение 1968 года внедрить экспресс-метод
определения резус-фактора на плоскости согласно Инструкции по применению
экспресс-метода (Приложение N 2).
Министр здравоохранения СССР
Б.ПЕТРОВСКИЙ
Приложение N 1
к Приказу Министра
здравоохранения СССР
от 23 декабря 1967 г. N 980
ИНСТРУКЦИЯ <*>
ПО ПРИГОТОВЛЕНИЮ СЫВОРОТОК АНТИРЕЗУС
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА ЭКСПРЕСС-МЕТОДОМ
НА ПЛОСКОСТИ БЕЗ ПОДОГРЕВА
--------------------------------
<*> Разработана
в иммуногематологической лаборатории ЦОЛИПК.
Специальное оснащение и реактивы:
1. Сыворотки антирезус
группы AB(IV) с титром неполных антител не ниже 1:32.
2. Стандартные изогемагглютинирующие
сыворотки AB(IV).
3. Образцы свежей резус-положительной и
резус-отрицательной крови, взятой на гепарине.
4. Альбумин, полученный из плазмы
человека, или полиглюкин.
5. Гепарин "Гедеон
Рихтер".
6. Физиологический раствор.
7. Центрифужные
пробирки.
8. Тарелки.
9. Стеклянные палочки.
Определение резус-фактора на плоскости
без подогрева достигается путем добавления к сыворотке антирезус
альбумина или полиглюкина, в присутствии которых
сыворотки с неполными антителами приобретают способность агглютинировать
резус-положительные эритроциты.
I. ПРИГОТОВЛЕНИЕ
ТЕСТОВЫХ СЫВОРОТОК АНТИРЕЗУС
С ПРИМЕНЕНИЕМ АЛЬБУМИНА
Определение оптимальных соотношений
сыворотки антирезус и раствора альбумина.
1. В штатив устанавливают 9
пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят пипеткой одну каплю 20% раствора
альбумина в физиологическом растворе, во вторую - 2 капли, в третью - 3 капли и
т.д.
2. В каждую пробирку добавляют по одной
капле сыворотки антирезус и содержимое пробирок
тщательно перемешивают.
3. Из каждой пробирки по одной капле
смеси сыворотки с альбумином переносят на тарелку, располагая в два ряда.
4. В капли верхнего ряда той же пипеткой
вносят по одной капле свежей цельной резус-положительной крови, взятой на
гепарине (1 капля гепарина на 5 мл крови). В нижний ряд соответственно вносят
по 1 капле резус-отрицательной крови. Смесь перемешивают стеклянной палочкой,
затем тарелку периодически покачивают в течение 3 минут.
5. В каждую каплю верхнего и нижнего ряда
по истечении 3 минут добавляют по 1 капле физиологического раствора. Тарелку
снова покачивают, пока кровь не перемешается с физиологическим раствором.
Результат учитывают через 5 минут с момента перемешивания сыворотки с кровью.
Трактовка
результатов
Четкая агглютинация в капле верхнего ряда
и отсутствие агглютинации в соответствующей капле нижнего ряда указывают на
оптимальное соотношение альбумина и используемой сыворотки антирезус.
Выбранные соотношения применяют для
приготовления тестовой сыворотки антирезус в
необходимых объемах. К приготовленной сыворотке добавляют гепарин из расчета 1
- 2 капли на 10 мл сыворотки.
Примечание. 1. На 100 мл альбумина
добавляют 2 гр. борной кислоты.
2. Концентрация исходного раствора
альбумина может варьировать:
а) если агглютинация резус-положительных
эритроцитов не достаточно сильно выражена или медленно появляется (к 5 мин.),
то концентрацию альбумина в растворе следует увеличить до 25 - 30%;
б) если в капле, где должна быть
отрицательная реакция, имеется неспецифическая агглютинация, то концентрацию
альбумина в растворе следует понизить до 15%.
Приготовленную тестовую сыворотку антирезус необходимо тщательно проверить по нескольким
образцам стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.
II. ПРИГОТОВЛЕНИЕ
ТЕСТОВЫХ СЫВОРОТОК АНТИРЕЗУС
С ПРИМЕНЕНИЕМ ПОЛИГЛЮКИНА
Ввиду того, что сыворотки антирезус в комбинации с полиглюкином
обладают способностью неспецифически агглютинировать эритроциты, их необходимо перед добавлением
полиглюкина разводить специально подобранными изогемагглютинирующими сыворотками AB(IV).
1. Выбор изогемагглютинирующей
сыворотки для разведения сыворотки антирезус:
а) в штатив помещают 5 - 10
пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят 2 капли изогемагглютинирующей
сыворотки группы AB(IV) одной серии, во вторую - 2 капли другой серии и т.д.;
б) в каждую пробирку добавляют по 1 капле
18% раствора полиглюкина. Содержимое пробирок
тщательно перемешивают;
в) из каждой пробирки переносят на
тарелку по 1 капле смеси сыворотки с полигклюкином и
рядом помещают по одной капле свежей крови, взятой на гепарине;
г) капли перемешивают стеклянной
палочкой; тарелку периодически покачивают в течение 5 минут, после чего
выбирают сыворотку, которая в смеси с полиглюкином не
вызывает неспецифической агглютинации эритроцитов в течение 3 - 4 минут.
2. Определение оптимального разведения
сыворотки антирезус, отобранной изогемагглютинирующей
сывороткой AB(IV):
а) в штатив устанавливают 9
пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят пипеткой одну каплю
отобранной изогемагглютинирующей сыворотки, во вторую
- 2, в третью - 3 и т.д.;
б) в каждую пробирку добавляют по одной
капле сыворотки антирезус и содержимое пробирок
тщательно перемешивают;
в) начиная со второй пробирки, отсасывают
содержимое с таким расчетом, чтобы в каждой из них осталось по 2 капли
приготовленной смеси сывороток;
г) в каждую пробирку добавляют по 1 капле
18% раствора полиглюкина и перемешивают его с
сывороткой;
д) из каждой пробирки по одной капле
приготовленной смеси сыворотки и полиглюкина
переносят на тарелку, располагая в два ряда;
е) в капли верхнего ряда вносят по 1
капле свежей цельной резус-положительной крови, взятой на гепарине. В нижний
ряд соответственно вносят по 1 капле резус-отрицательной крови. Смесь
перемешивают стеклянной палочкой; тарелку периодически покачивают в течение 3 минут;
ж) в каждую каплю верхнего и нижнего ряда
по истечении 3 - 4 минут добавляют по 1 капле физиологического раствора.
Тарелку снова покачивают, пока кровь не перемешается с физиологическим
раствором. Результат учитывают через 5 минут с момента перемешивания сыворотки
с кровью.
Четкая агглютинация в капле верхнего ряда
и отсутствие агглютинации в соответствующей капле нижнего ряда указывают на
оптимальное разведение сыворотки антирезус изогемагглютинирующей сывороткой.
Выбранное соотношение используют для
приготовления тестовой сыворотки антирезус в
необходимых объемах. К приготовленной сыворотке добавляют гепарин из расчета 1
- 2 капли на 10 мл сыворотки.
3. Освобождение тестовой сыворотки антирезус от хлопьев, выпадающих при добавлении полиглюкина:
а) тестовую сыворотку оставляют в
холодильнике на 2 суток при температуре 4 - 8 °C;
б) выпавшие в тестовой сыворотке хлопья
отделяют центрифугированием при 3000 - 5000 об./мин. в течение 15 - 20 мин.;
в) прозрачную часть сыворотки отсасывают
и пропускают через бумажный фильтр;
г) приготовленную тестовую сыворотку
проверяют по нескольким образцам стандартных резус-положительных и
резус-отрицательных эритроцитов.
Примечание. 1. Необходимая концентрация полиглюкина достигается выпариванием 6% раствора до 1/3 его
первоначального объема. На 100 мл приготовленного 18% полиглюкина
добавляют 4 г борной кислоты.
2. Соотношение полиглюкина
и сыворотки может варьировать. Если агглютинация резус-положительных
эритроцитов недостаточно сильная или медленно появляется (к 5 мин.), следует на
5 объемов сыворотки антирезус добавить 3 объема 18% полиглюкина.
III. ПРИГОТОВЛЕНИЕ
КОНТРОЛЬНОЙ СЫВОРОТКИ
При каждом определении резус-принадлежности
крови необходимо параллельно проводить контрольное исследование на
специфичность.
Контрольную сыворотку готовят из изогемагглютинирующей сыворотки группы AB(IV) с добавлением
к ней альбумина или полиглюкина в тех же
соотношениях, которые были использованы для приготовления тестовой сыворотки антирезус.
При применении полиглюкина
контрольную сыворотку готовят из изогемагглютинирующей
сыворотки, которую использовали для разведения сыворотки антирезус.
Агглютинация эритроцитов в капле
контрольной сыворотки должна отсутствовать во всех случаях.
IV. ОБЩИЕ ЗАМЕЧАНИЯ
1. При определении резус-фактора
тестовыми сыворотками антирезус, приготовленными в
сочетании с альбумином или полиглюкином, необходимо
одновременно проводить контрольное исследование на специфичность реакции.
2. В капле контрольной сыворотки
агглютинация эритроцитов должна отсутствовать. Если же в контрольной капле
имеется агглютинация эритроцитов, то это следует отнести за счет неспецифичности исследуемого образца крови, что наблюдается
у некоторых больных и может привести к неправильной трактовке результатов. В
таких случаях заключение о резус-принадлежности крови
не может быть выдано и больным переливают резус-отрицательную кровь.
3. Определять резус-фактор можно при
температуре 15 - 35 °C.
4. Срок годности тестовых и контрольных
сывороток от 3 до 6 месяцев при хранении в холодильнике (4 - 6 °C).
5. Тестовые сыворотки контролируются не
реже 2 раз в месяц лабораторией, где они изготовлены.
Начальник Главного управления
лечебно-профилактической
помощи детям и матерям
Л.СКОРНЯКОВА
Приложение N 2
к Приказу Министра
здравоохранения СССР
от 23 декабря 1967 г. N 980
ИНСТРУКЦИЯ <*>
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕЗУС-ФАКТОРА ЭКСПРЕСС-МЕТОДОМ
НА ПЛОСКОСТИ
ПРИ КОМНАТНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ С ПОМОЩЬЮ СЫВОРОТОК,
ПРИГОТОВЛЕННЫХ НА АЛЬБУМИНЕ ИЛИ
ПОЛИГЛЮКИНЕ
--------------------------------
<*> Разработана
в иммуногематологической лаборатории ЦОЛИПК.
Оснащение: сыворотка антирезус
универсальная - AB(IV), контрольная сыворотка, физиологический раствор,
тарелки, стеклянные палочки.
Кровь для реакции берут из пальца
непосредственно перед определением. Можно использовать также свежие (не более
2-дневного хранения при +4 °C) эритроциты, взятые со дна пробирки после
центрифугирования или отстаивания от плазмы с консервантом.
Техника определения: на тарелку слева
наносят одну каплю сыворотки антирезус и справа -
одну каплю контрольной сыворотки. Рядом с этими каплями помещают по одной капле
крови в количестве 1/2 от объема взятой сыворотки. Стеклянной палочкой
перемешивают кровь с сыворотками и размазывают на тарелке до получения тонкого
слоя. После этого тарелку периодически покачивают. Через 3 - 4 мин. в обе капли
необходимо добавить по одной капле физиологического раствора для снятия
возможной неспецифической агглютинации и продолжать наблюдение при покачивании
тарелки до истечения 5 мин., после чего учитывают результат.
Оценка результатов: при положительном
результате агглютинация наблюдается только в одной капле - слева, с сывороткой антирезус. При отрицательном результате агглютинация
отсутствует в обеих каплях и они остаются равномерно
окрашенными (см. рис. - не приводится).
Агрегацию эритроцитов в зоне подсыхания по периферии капли не учитывают!
Начальник Главного управления
лечебно-профилактической помощи
детям и матерям
Л.СКОРНЯКОВА