Утверждена
Министерством
рыбного хозяйства СССР
20 марта 1969 года
ИНСТРУКЦИЯ
ПО СБОРУ И ХРАНЕНИЮ ПРОБ ВОДЫ, ГРУНТА И РЫБЫ
ПРИ ОБНАРУЖЕНИИ МАССОВОЙ ГИБЕЛИ РЫБЫ
I. Отбор и хранение
проб воды
Пробы воды в реках отбираются на
расстоянии 1 - 2 м от берегов и на середине реки. В море пробы отбираются в
нескольких точках в районе гибели рыбы.
При глубинах водоема менее 1,5 м пробу
берут из среднего слоя, а при большей глубине - с двух горизонтов: поверхности
и дна.
Пробы воды отбираются батометром и
наливаются в чистые бутылки. Каждая проба должна быть снабжена этикеткой, где
указывается следующее: дата отбора, место взятия пробы, глубина места, горизонт
взятия пробы, элемент, на который взята проба, температура воды, фамилия и
должность лица, проводившего сбор.
Этикетка пишется простым карандашом на
пергаментной бумаге.
1. Кислород
Склянки для взятия пробы на кислород
должны быть обязательно с притертыми пробками, объемом 100 - 150 мл.
Кислородная склянка ополаскивается перед заполнением водой, которая
анализируется 2 - 3 раза. Заполнение склянки исследуемой водой производится
следующим образом: резиновую трубочку от батометра опускают до дна склянки и
начинают заполнение склянки водой, избегая пузырьков воздуха, для чего дают
воде перелиться через край. Если пузырьки остаются, то слегка покачивают
склянку. После этого следует зафиксировать пробу. Для этого в склянку с
отобранной пробой приливают 1 мл хлористого марганца и 1 мл щелочного раствора йодистого
калия. Склянку плотно закрывают пробкой и тщательно перемешивают 25 - 30 раз,
плавно переворачивая в руках. После этого пробу ставят в темное прохладное
место. Не позже чем через сутки следует провести анализ.
2. Пробы на БПК
5
Пробы на
биохимическое потребление
кислорода (БПК ) на пятые
5
сутки отбирают
так же, как и пробы на кислород. После взятия пробы
склянку тут же плотно накрывают пробкой и ставят в
темное место,
поддерживая температуру
воздуха +20 °С (можно пробу поставить в
таз с
водой при Т +20°) и дают ей простоять пять суток со дня
взятия пробы.
Пробы на БПК берут в темные склянки с притертой
5
пробкой, объемом
30 - 50 мл.
По истечении пяти дней пробу фиксируют 1
мл хлористого марганца и 1 мл щелочного раствора йодистого калия. Не позже чем
через сутки следует провести анализ.
3. Пробы на pH
Активная реакция среды (pH) определяется тут же на месте. Пробы воды
транспортировке и хранению не подлежат.
4. Пробы на фенолы
Пробы на фенолы отбираются в чистые
литровые бутылки и фиксируют 5 г кристаллической щелочи (KOH). Хранят в темном
месте. Хранение проб допускается до четырех месяцев.
5. Тяжелые металлы
Пробы воды на тяжелые металлы отбирают в
полиэтиленовые канистры или бутылки из белого стекла (обычные бутылки зеленого
стекла не пригодны для этих проб) и фиксируются 2 - 5 куб. см хлороформа. В
зимний и осенний периоды фиксация не обязательна. Общий объем пробы должен быть
не меньше 2 л. В течение 10 - 15 дней пробы должны быть доставлены в
лаборатории.
6. Окисляемость
Пробы воды
на окисляемость речной воды
отбираются в чистые
бутылки любого
размера и в течение суток должны быть доставлены в
лабораторию, зафиксированные серной
кислотой (H SO )
2 4
концентрированной 1 куб.
см на 0,5 л воды. Пробы морокой воды не
подлежат
транспортировке и хранению. Следует тут же на месте вести
анализ.
7. Биогенные
элементы (фосфор, аммиак)
Воду наливают в две любые чистые бутылки
объемом не меньше 0,250 мл и в течение суток доставляют в лабораторию.
8. Нефтепродукты
В литровую бутылку наливают пробу воды и
плотно закрывают пробкой, проба ничем не фиксируется. Хранение проб допускается
до 4 месяцев.
9. Ядохимикаты
Во всех случаях, когда возникает
подозрение, что в водоем могли попасть инсектициды, гербициды и другие
пестициды, для их выявления в чистую стеклянную посуду собирают 500 мл воды.
Пробу снабжают этикеткой с точным указанием всех основных данных (см.
Приложение I). Собранные таким образом пробы доставляют в течение одних суток в
ближайшую лабораторию, в которой производится анализ продуктов и воды на
наличие ядохимикатов (Приложение III).
II. Грунт
Пробы грунта берут дночерпателем
с поверхности дна, высушивают при комнатной температуре, растирают в ступке,
просеивают через мелкое сито и упаковывают в стеклянные банки с
навинчивающимися пробками. Одна проба должна содержать не менее 600 г грунта
воздушной сухости. Каждая проба снабжается этикеткой (см. Приложение I). В
течение 2 - 5 дней пробы должны быть доставлены в лаборатории.
III. Рыба
(при подозрении на отравление ядохимикатами)
Для исследований пригодна исключительно
свежая рыба - погибающая или только что погибшая. Каждый экземпляр снабжается
этикеткой с подробными сведениями как о самой рыбе,
так и о предполагаемых обстоятельствах отравления (см. Приложение III).
Кровь берут путем перерезания жаберных сосудов (у осетровых) или отсечения
хвостового стебля (у прочих). Кровь
собирается в чистые стеклянные пробирки с притертыми пробками в количестве не
менее 5 мл. Проба заливается 15 - 20 мл сернистого эфира. На пробирке
отмечается номер рыбы и дата взятия крови.
Внутренние органы, а также личинки,
мальки и молодь рыбы помещаются в фарфоровые ступки, в которых их растирают с
сернокислым натрием: на 1,5 г ткани добавляют 10 - 20 г реактива. После этого
пробы переносят в склянки с притертыми пробками и заливают:
а) при небольшом количестве жира - н-гексаном;
б) при обилии жира - спиртом метиловым
или этиловым, но обязательно ректификатом; гидролизные спирты для этого
совершенно непригодны;
в) при исследовании на ДДТ или ГХПГ пробы
во всех случаях помещают в концентрированную соляную кислоту.
Мышцы рыбы отделяют от костей и кожи,
пропускают через мясорубку и помещают в склянки с притертыми пробками. На 5 г
размельченных тканей добавляют 15 - 20 мл н-гексана.
Собранные таким образом пробы должны быть
в течение 2 - 5 дней доставлены в лабораторию для проведения хроматографического анализа.
Примечание. Химический анализ может быть
сделан только на строго определенное вещество. Сообразно с этим присылка
материала должна сопровождаться данными о тех пестицидах, которые применялись
вблизи района гибели рыбы. Если такие данные отсутствуют, то проведение анализа
на ядохимикаты становится бесцельным.
IV. Сбор материала
при заболевании рыб
(бактериология, вирусология)
Материал берется только от живых
экземпляров, но с признаками поражения. Рыба снабжается номером и в полевой
дневник заносят данные о времени и месте поимки, о длине и весе данного
экземпляра, о клинической картине заболевания и фамилии лица, ответственного за
сбор.
1. Кровь для получения сыворотки собирают
в пробирку с соблюдением правил асептики (у осетровых - путем надреза жабр; у
остальных пород - отсечением хвостового стебля). Пробирку с кровью оставляют на
2 - 3 час. в наклонном
положении при комнатной температуре, а затем 12 - 20 час. выдерживают на
холоде. Отделившуюся прозрачную сыворотку осторожно отсасывают стерильной
пипеткой Ру, в которую ее и запаивают (в месте
перетяжки), наклеивают этикетку с номером рыбы и датой взятия пробы.
2. При наличии язв на поверхности тела
рыбы или нарывов последние протираются спиртовым факелом, и пастеровской
пипеткой делается прокол места поражения; содержимое выдувается в пробирку со
средой Кладницкого (к МПб
прибавляется 0,5% агара). Затем
кусочек (не более 1 г на 5 мл среды) помещается в пузырек с глицериновым
раствором (поровну - 0,65% физиологического раствора и глицерина с pH = 7,2), другой - в жидкость Дюбоск-Бразилия
(насыщенный раствор пикриновой кислоты на 80 г спирта, 15 мл + 6 мл формалина +
1,5 мл ледяной уксусной кислоты) - не более 2 г ткани на 22 мл среды.
3. Асептически
вскрывается брюшная полость: место разреза (от ануса параллельно спинной линии)
протирается спиртовым факелом. Стерильными пипетками Пастера берется субстрат
печени, почек, селезенки, содержимое кишечника - в среду Кладницкого,
а затем кусочки этих же органов - соответственно в глицериновый раствор и
жидкость Дюбоск-Бразилия. При наличии жидкости в
брюшной полости нужно брать и ее. Затем следует вложить пергаментную этикетку с
номером и датой, закрыть сосуд резиновой пробкой и запарафинировать.
4. Переложить ампулы с сывороткой в
коробку с ватой и запаковать в ящик вместе с другими пробами.
5. Послать авиапочтой (адреса учреждений
указаны ниже).
Примечание. Если сбор материала
производится некомпетентными и неподготовленными лицами, то исследуемая рыба в
течение одного часа подвергается глубокому замораживанию и срочно доставляется
в лабораторию, где будет производиться дальнейший анализ.
Приложения I и II
I. Этикетки при пробах воды и грунта
должны содержать следующие данные:
место забора воды или грунта;
дату забора;
глубину водоема в месте забора;
суточный расход воды в период гибели рыбы
(для рек);
время обработки окрестных полей или лесов
ядохимикатами;
величину обработанной площади;
расход препарата на 1 га обрабатываемой
поверхности.
II. При работе с отравленной рыбой каждый
исследуемый экземпляр должен быть записан под своим особым номером в полевой
дневник. Рыба должна быть измерена и взвешена, должны быть точно записаны
клинические признаки заболевания и приведены все данные, указанные в Приложении
I и относящиеся к подробностям обработки окрестностей сельскохозяйственными
препаратами.
Приложение III
Организации, которые могут провести
изучение присланного материала:
ВИЭВ - Всесоюзный институт
экспериментальной ветеринарии (г. Москва) - по микробиологии и патогистологии.
Казанский ветеринарный институт
(Минсельхоз СССР).
УкрНИРХ - Украинский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства
(Киев, Львов) - по микробиологии и патогистологии.
Саратовский зооветинститут
(Минсельхоз СССР).
ВНИИГИНТОКС - Всесоюзный
научно-исследовательский институт токсикологии и гигиены пестицидов,
пластических и полимерных масс (г. Киев) - по ядохимикатам.
ГосНИОРХ - Государственный научно-исследовательский институт озерного рыбного
хозяйства (г. Ленинград) - по микробиологии, патогистологии
и все пробы воды.
Ветеринарный институт (г. Ленинград) - по
микробиологии и патогистологии.
КрасНИИРХ - Краснодарский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства
(г. Краснодар) - по микробиологии и все пробы воды.
Всесоюзный научно-исследовательский
институт ветеринарной санитарии (Минсельхоз СССР).
ЦНИОРХ - Центральный
научно-исследовательский институт осетрового рыбного хозяйства (г. Астрахань) -
по патогистологии.
КаспНИРХ - Каспийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства (г.
Астрахань) - по микробиологии и воде на все анализы.
Сельскохозяйственный институт (г. Киров)
- по микробиологии и патогистологии.
Все областные СЭС -
санитарно-эпидемиологические станции - на ядохимикаты.
НЕОБХОДИМЫЕ
МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ СБОРА ПРОБ ВОДЫ, ГРУНТА И РЫБЫ
I. Посуда для отбора проб воды
1. Бутылки с притертыми пробками объемом
100 - 150 куб. см для кислорода 20 шт.
2. Бутылки с притертыми пробками темного
цвета,
объемом 30 - 50 куб. см для БПК 20 шт.
5
3. Бутылки объемом 1 л для фенолов 20 шт.
4. Канистры полиэтиленовые объемом 2,5 или
5 л 10 шт.
5. Бутылки объемом 0,5 л для
окисляемости 20 шт.
6. Бутылки объемом 0,250 или 0,5 л для биогенных
элементов 20 шт.
7. Бутылки объемом 1 л для нефтепродуктов
<*> 20 шт.
--------------------------------
<*> Указанное количество химической
посуды и реактивов рассчитано на обследование одного случая массовой гибели
рыбы.
II. Реактивы для фиксации проб
1. Хлористый марганец 100 г
2. Щелочной раствор йодистого калия 100 г
3. Кристаллический КОН (едкий калий) 150 г
4. Хлороформ 100 г
III. Материалы для сбора проб
на определение ядохимикатов в воде и грунте
Бутылки с притертыми пробками 0,5 л 30 шт.
Банки с завинчивающимися
пластмассовыми
пробками по 0,5 л 20 шт.
Пробирки с притертыми пробками 20 шт.
Фарфоровые ступки с пестиками 3 шт.
Склянки с притертыми пробками 25 - 50
мл 20 шт.
н-гексан 500
мл
Сернистый эфир 250 мл
Сернокислый натрий 500 г
Соляная кислота 250 мл
IV. Необходимые средства, стерильная посуда,
инструменты
при сборе патологического материала в полевых
условиях
(бактериология, вирусология) из расчета на 10
больных рыб
Стерильные пробирки 30 шт.
Стерильные пипетки Ру 30 шт.
Стерильные пастеровские пипетки 100 шт.
Пробирки со средой Кладницкого (менять ежегодно,
хранить при Т не
выше 20 °С) 50 шт.
Спиртовый раствор
пикриновой кислоты 150 мл <*>
Формалин 60
мл <*>
Ледянка 15
мл <*>
Склянки для среды Дюбоск-Бразилия 50 шт.
Спирт (гидролизный) для обжигания рыбы
и инструмента 200 г
Набор инструмента:
пинцет 2
шт.
реберный нож 1 шт.
ножницы большие 1 шт.
ножницы малые 2 шт.
Вата
100 г
Марля
2 м
Штатив для пробирок 1 шт.
Пергамент 1 м
Спиртовка, спички
Стакан или банка для спирта
Емкость для отбросов
--------------------------------
<*> Хранить в хорошо закупоренных
склянках.