Утверждено
заместителем Главного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
31 июля 1973 года
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЕВИНА
В ПЛОДОВО-ЯГОДНЫХ КУЛЬТУРАХ И КОНСЕРВАХ
(МЕТОДИЧЕСКОЕ УКАЗАНИЕ)
Севин (1-нафтил-N-метилкарбамат) обладает широким диапазоном инсектицидного
действия. Рекомендуется для опрыскивания садов в очагах массового размножения
плодожорки, а также для борьбы с вредителями хлопчатника и кукурузы. Норма
расхода 85-процентного смачивающегося порошка севина
1 - 2,5 кг/га.
Краткие сведения о
физико-химических свойствах препарата
Химически чистый севин
- кристаллическое вещество белого цвета, без специфического запаха, имеющее
температуру плавления 142 °C, давление паров менее 0,005 мм рт. ст. при 26 °C. Севин слаборастворим в воде (менее 0,1%), несколько лучше в
углеводородах и спиртах, умеренно (до 40%) в органических растворителях
(ацетоне, циклогексаноле), хорошо - в полярных
растворителях, таких как диметилформамид и диметилсульфоксид. Устойчив к
воздействию ультрафиолетового излучения. В щелочной среде севин
быстро гидролизуется, образуя 1-нафтол, метиламин и
соответствующий карбонат.
Принцип метода
Севин извлекают из растительных пищевых продуктов хлороформом. Освобождение
от примесей осуществляют в метаноловом растворе
добавлением водного раствора хлористого аммония с последующим фильтрованием
через бумажный фильтр и хроматографированием через
слой окиси алюминия.
Выделенный севин гидролизуют
едким кали, и образующийся 1-нафтол сочетают с хлористым п-нитрофенилдиазонием,
в результате чего образуется азосоединение - в кислой
среде оранжевого, в щелочной - синего цвета.
Чувствительность
определения в щелочной среде 0,05 мг, в кислой - 0,1 мг/кг. Точность метода +/- 5 - 10%.
Реактивы и растворы
Хлороформ, х.ч.
Метанол, х.ч.
Аммоний хлористый, х.ч.
2-процентный водный раствор.
Уксусная кислота ледяная, х.ч.
Смесь метанола и 2-процентного водного
раствора хлористого аммония (1:1).
Алюминия окись для хроматографирования
П активности.
Натрий сернокислый безводный, х.ч.
Калий едкий 0,1 н. растворов в метаноле.
Натрия нитрит, х.ч.,
0,8-процентный водный раствор.
п-Нитроанилин.
п-Нитрофенил
хлористый, свежеприготовленный. К 0,02-процентному раствору п-нитроанилина в 0,1 г соляной кислоте доливают в 10 раз
меньшее количество 0,8-процентного водного раствора нитрита натрия. Раствор
готовят в колбе, погруженной в ледяную воду.
Стандартный раствор севина:
10 мг севина, х.ч.,
растворяют в 100 мл хлороформа. 10 мл этого раствора переносят в мерную колбу
емкостью 100 мл и доводят до метки хлороформом. 1 мл раствора содержит 10 мкг севина.
Химически чистый
севин можно получить путем перекристаллизации
технического. Для этого последний растворяют в горячем этиловом спирте
(растворимость препарата около 40%), фильтруют через бумажный фильтр, используя
воронку для горячего фильтрования, фильтрат охлаждают до 0°. Выпавшие кристаллы
отделяют от маточного раствора, промывают холодным спиртом и сушат. В случае
необходимости перекристаллизацию можно повторить.
Приборы и посуда
Фотоэлектроколориметр.
Устройство для отгона растворителей.
Установка для хроматографирования,
состоящая из колонки (стеклянная трубка, зауженная книзу, 17 х 400 мм) и колбы
Бунзена. В колонку помещают ватный тампон, затем слой окиси алюминия 5 - 7 см и
затем слой безводного сульфата натрия 1,5 - 2 см. Подготовленную колонку
промывают хлороформом (10 - 15 мл).
Центрифуга.
Аппарат для встряхивания.
Воронки делительные емкостью 150 - 250
мл.
Колбы конические емкостью 50, 100 и 250
мл.
Цилиндры мерные на 25, 50, 250 и 500 мл.
Пипетки на 1, 5 и 10 мл.
Сосуды для экстракции емкостью 1,5 - 2 л.
Ход анализа
Пробку исследуемого растительного
продукта весом 1 - 1,5 кг измельчают, тщательно перемешивают и навеску в 200 г
(для 2-х параллельных анализов) заливают хлороформом и оставляют на 16 - 18
часов. Полученный экстракт фильтруют через бумажный фильтр, измеряют объем
фильтра и часть его, соответствующую 100 г пробы, помещают в колбу и отгоняют
хлороформ. Последние порции растворителя отгоняют без нагревания.
Для растворения сухого остатка в колбу
приливают 10 мл метанола, осторожно потирая дно стеклянной палочкой. Затем
добавляют 10 мл 2-процентного раствора хлористого аммония и помещают колбу в
холодильник (лучше в замораживатель) на 20 - 30 минут.
В результате добавления водного раствора
хлористого аммония растворимость восков и пигментов в метаноле резко уменьшается и они выделяются в виде хлопьев. После
охлаждения содержимое колбы фильтруют через бумажный мелкопористый фильтр.
Фильтрование лучше проводить с помощью водоструйного насоса. Для этого
стеклянную воронку с пробкой и плотно прилегающим фильтром (лучше двойным)
вставляют в пробирку с отводом, которую подключают к водоструйному насосу.
Содержимое колбы количественно переносят
на воронку, ополаскивая колбу дважды по 3 - 5 мл охлажденной смесью метанола и
2-процентного раствора хлористого аммония (1:1). Фильтрат из пробирки переносят
в делительную воронку и экстрагируют севин
хлороформом, энергично встряхивая первый раз с 25 мл, второй - с 15 мл.
Хлороформный экстракт хроматографируют через колонку,
заполненную окисью алюминия и б/в сульфатом натрия,
предварительно промытую хлороформом. Сначала пропускают первую порцию экстракта
- 25 мл, затем вторую - 15 мл и промывают колонку 15 мл хлороформа. Полученный
фильтрат количественно переносят в колбу и отгоняют хлороформ досуха.
К сухому остатку прибавляют 5 мл 0,1 н. метанолового раствора едкого кали и, помешивая стеклянной
палочкой, оставляют на 5 мин.
Полученный в результате гидролиза севина 1-нафтол
может быть определен двумя способами: а) в щелочной и б) в кислой среде.
При определении 1-нафтола в щелочной
среде в колбу, где протекал гидролиз севина,
добавляют 1 мл солянокислого раствора п-нитрофенилдиазония,
приготовленного перед употреблением, как указано в разделе "Реактивы и
растворы". При взаимодействии в щелочной среде 1-нафтола и хлористого п-нитрофенилдиазония образуется азосоединение
синего цвета. В колбочку доливают еще 5 мл метанола и помещают ее в холодильник
на 30 мин. Затем раствор фильтруют через бумажный фильтр и колориметрируют
при оранжевом светофильтре и длине волны 590 ммк в
кювете с расстоянием между гранями 1 см.
В случае, если
конечная окраска искажена до фиолетовой или красной, определение рекомендуется
проводить в кислой среде. Для этого в колбу, где протекал щелочной гидролиз севина, приливают 14 мл ледяной уксусной кислоты и 1 мл
свежеприготовленного солянокислого раствора п-нитрофенилдиазония.
В кислой среде образуется азосоединение оранжевого
цвета. Полученный раствор оставляют на 30 мин. при комнатной температуре, затем
фильтруют через бумажный фильтр и колориметрируют при
зеленом светофильтре и длине волны 475 ммк в кювете с
расстоянием между гранями 2 см.
В качестве холостой пробы при колориметрировании в обоих случаях используется
дистиллированная вода.
Определение севина в фруктово-ягодных компотах и маринадах
100 г исследуемой пробы (учитывать
соотношение сиропа и ягод) после измельчения и тщательного перемешивания
количественно переносят в колбу с притертой пробкой и заливают хлороформом с
таким расчетом, чтобы покрыть навеску. Экстрагируют севин
путем встряхивания в течение 30 мин. В случае образования стойкой эмульсии для
разделения слоев следует воспользоваться центрифугой. Центрифугирование
проводят в течение 30 мин. со скоростью 2500 об./мин. После центрифугирования удаляют верхний слой (сироп и
ягоды) с помощью пипетки Мора и резиновой груши, а нижний - хлороформный -
сушат с помощью безводного сульфата натрия. Высушенный экстракт помещают в
колбу для отгона растворителей и удаляют хлороформ. Дальнейший ход анализа
аналогичен определению содержания севина в сырых
ягодах и фруктах.
Построение
калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в
колбы вносят последовательно 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 7,5 и 10 мл стандартного
раствора, содержащего 10 мкг севина в мл.
Растворитель осторожно удаляют и далее поступают, как описано для определения севина в растительной пробе, начиная с гидролиза пестицида.
Содержание севина
в мг/кг продукта вычисляют по следующей формуле:
С
Х = -,
Р
где:
Х - количество севина
в продукте, мг/кг;
С - количество севина,
найденное по калибровочному графику, мкг;
Р - навеска исследуемого продукта, г.
Таблица
ПРОЦЕНТ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕВИНА В ЯБЛОКАХ (НАВЕСКА 100
Г)
┌────────────────────────────────┬─────────────────────────────────┐
│
В щелочной среде │ В кислой среде │
├────────┬─────────┬─────────────┼─────────┬─────────┬─────────────┤
│количес-│количес- │% определения│количес-
│количес- │% определения│
│тво вне-│тво
обна-│ │тво
вне- │тво обна-│ │
│сенного
│руженного│ │сенного │руженного│ │
│севина │севина │ │севина │севина │ │
├────────┴─────────┤ ├─────────┴─────────┤ │
│ в мкг │ │ в мкг │ │
├────────┬─────────┼─────────────┼─────────┬─────────┼─────────────┤
│5 │5 │100 │20 │19 │94 │
│5 │5 │100 │20 │20 │100 │
│10
│9 │90 │20 │21 │105 │
│10 │10 │100 │40 │40 │100 │
│20 │18 │92 │40 │40 │100 │
│20 │19 │95 │80 │80 │100 │
│40 │38 │95 │80 │82 │102 │
│40 │40 │100 │100 │100 │100 │
│50 │47 │94 │100 │97 │97 │
│50 │46 │92 │ │ │ │
└────────┴─────────┴─────────────┴─────────┴─────────┴─────────────┘
Метод может быть использован для
определения остаточного содержания севина в
землянике, черной смородине, крыжовнике, сливах, яблоках, а также компотах и
маринадах из плодов перечисленных культур.
Подготовлено в Институте питания АМН
СССР.