Утверждено
Минздравом СССР
23 января 1975 г. N 1222-75
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ
В МЯСЕ, МЯСОПРОДУКТАХ И ЖИВОТНЫХ ЖИРАХ
ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ
Принцип метода
<*>
--------------------------------
<*> Разработан
Всесоюзным научно-исследовательским институтом мясной промышленности.
Метод основан на экстракции пестицидов из
пробы ацетоном первичной очистке экстракта от основной части жира
"вымораживанием", окончательной адсорбционной очистке экстракта путем
колоночной хроматографии на силикагеле АСК и последующей хроматографии
очищенных и сконцентрированных экстрактов в тонком слое окиси алюминия или
силикагеля.
Чувствительность метода: 0,02 - 0,08
мг/кг продукта.
Реактивы и растворы
Гексан, хч.
Петролейный эфир (температура кипения 40 - 70°), ч.
Ацетон, ч.
Бензол, чда.
Натрий сернокислый безводный, хч, просушенный при 150° в течение 5 часов.
Натрий сернокислый - 2-процентный водный
раствор и насыщенный водный раствор.
Адсорбенты для тонкослойной
хроматографии:
- окись алюминия II степени активности -
адсорбент предварительно многократно промывают дистиллированной водой до
отрицательной реакции на ион хлора и высушивают на воздухе, просеивают через
сито 100 меш;
- силикагель марки КСК (очистку см.
"Методы определения микроколичеств пестицидов в
продуктах питания, почве и воде", М., 1968);
- пластинки "Силуфол"
(ЧССР), предварительно промытые водой в хроматографической
камере и просушенные на воздухе, перед использованием активируют в сушильном
шкафу при 65° в течение 4 мин.
Кальций сернокислый, просушенный при 150°
в течение 6 часов.
Стандартные растворы пестицидов:
- основной раствор: р,р-ДДТ и р,р-ДДЭ по 16 мг и
альфа- и гамма-ГХЦГ по 64 мг растворяют в 100 мл гексана;
- рабочие растворы готовят путем
разведения основного раствора гексаном в 4 и 8 раз.
Силикагель АСК.
Этиловый спирт, гидролизный, высшей
очистки.
Проявляющий реактив:
0,1 г азотнокислого серебра растворяют в
1 мл дистиллированной воды, добавляют 2 мл раствора аммиака (уд. вес 0,9) и доводят объем ацетоном
до 20 мл.
Гигроскопическая вата, обезжиренная в
аппарате Сокслета.
Приборы и посуда
Сито на 100 меш (диаметр отверстий 0,147
мм).
Гомогенизатор или микроизмельчитель
тканей.
Ртутно-кварцевая лампа (ПРК-2 или ПРК-4).
Прибор для отгонки органических
растворителей или роторный испаритель.
Камера для хроматографирования
(стеклянный сосуд с притертой крышкой или эксикатор).
Пульверизаторы стеклянные для
опрыскивания пластинок.
Камера для опрыскивания.
Бани водяные.
Колбы с притертыми пробками на 250 мл.
Длительные воронки на 100, 250 и 500 мл.
Колбы мерные на 50 и 100 мл.
Пипетки на 5 и 10 мл.
Колбы круглодонные на 150, 250 и 500 мл.
Медицинские шприцы на 1 мл с делениями
0,020 - 0,025 мл для нанесения проб и стандартных растворов.
Стеклянные хроматографические
колонки 400 х 20 мм.
Пластинки для хроматографии. Стеклянную
пластинку 9 х 12 см моют водой с содой, хромовой смесью, дистиллированной
водой, сушат, перед использованием протирают спиртом.
Приготовление
пластинок с тонким слоем адсорбента
Окись алюминия и сернокислый кальций
тщательно небольшими порциями перетирают в фарфоровой ступке, переносят в колбу
и встряхивают с бидистиллированной водой до
образования однородной массы. Эта масса должна иметь консистенцию, позволяющую
ей свободно растекаться до поверхности стеклянной пластинки без расслоения на
твердую фазу и воду.
Так как различные партии адсорбента часто
отличаются по своим свойствам, количество добавляемой воды подбирают опытным
путем, варьируя его в небольших пределах.
При этом критерием служит консистенция
получающейся сорбционной массы.
Соотношение компонентов - окись алюминия:сернокислый кальций:вода = 50:4:90 - 100; силикагель:сернокислый
кальций:вода = 35:2:90.
10 г сорбционной массы (2 чайных ложки)
наливают на пластинку и равномерно распределяют по всей поверхности. Пластинки
сушат при комнатной температуре 18 - 20 часов и хранят в эксикаторе.
Описание
определения
Подготовка пробы
200 - 250 г образца 1 - 3 раза измельчают
на мясорубке, тщательно перемешивают.
Рекомендуется дополнительное более тонкое
измельчение образцов (кроме жировой ткани) в гомогенизаторе.
Экстракция
пестицидов и первичная очистка экстрактов
25 г измельченного образца заливают 50 мл
ацетона, тщательно перемешивают и нагревают на горячей водяной бане до
закипания растворителя. Колбу охлаждают, добавляют в нее 10 мл охлажденного
2-процентного сернокислого натрия, перемешивают и охлаждают 30 минут в ледяной
бане. Затем сливают ацетоновый слой в круглодонную колбу через слой
обезжиренной ваты. Экстракцию ацетоном с последующим вымораживанием жира
повторяют еще 2 раза. Из объединенных экстрактов отгоняют ацетон на роторном
испарителе или в приборе для отгонки органических растворителей (температура
бани не более 70 +/- 2°) и трижды экстрагируют петролейным
эфиром: порциями 20 мл, 10 мл и 10 мл. Продолжительность 1-й экстракции 1 час,
последующих - 15 минут. При этом каждый раз перемешивают содержимое в течение
2-х минут, дают слоям разделиться и слой петролейного
эфира переносят в делительную воронку (емкость - 500 мл) с 40 мл 2-процентного
раствора сернокислого натрия. Смесь осторожно перемешивают в течение 2 минут,
дают слоям разделиться и водную фазу отбрасывают. Для улучшения разделения
слоев можно добавить несколько мл насыщенного раствора сернокислого натрия.
Операцию промывки экстракта повторяют еще 2 раза, после чего петролейный эфир сливают в стакан с 20 г безводного
сернокислого натрия, споласкивают делительную воронку дважды 5 мл петролейного эфира. Подсушенный экстракт количественно
переносят в мерный цилиндр на 50 мл и доводят петролейным
эфиром до 30 мл. Стакан с сернокислым натрием сохраняют.
Колоночная
хроматография
В нижнюю часть хроматографической
колонки помещают около 500 мг обезжиренной ваты. Затем насыпают силикагель АСК
(75 мл для очистки экстрактов свиного жира и 70 мл - для всех остальных).
Силикагель слегка уплотняют
постукиванием. Колонку промывают 50 мл петролейного
эфира и отжимают сорбент с помощью резиновой груши. Наносят на колонку 30 мл
экстракта, дают жидкости стечь и снова отжимают сорбент. Прошедший через
колонку растворитель отбрасывают.
Пестициды элюируют
110 мл смеси бензол - петролейный эфир (30:80). Элюирующую смесь вносят порциями по 30 мл, споласкивая
каждый раз цилиндр из-под экстракта и стаканчик с безводным сернокислым
натрием, в котором подсушивали экстракт.
Элюат собирают в круглодонную колбу на 150 мл. Через 10 мин. после стекания
последней порции растворителя отжимают сорбент с помощью резиновой груши.
Элюат упаривают до объема 0,1 мл и наносят на хроматографическую
пластинку.
Все органические растворители, остающиеся
после упаривания проб и промывки колонок, могут использоваться повторно после
перегонки над активированным углем или азотнокислым серебром (1 г/л).
Хроматография в
тонком слое
Перед нанесением проб хроматографические
пластинки размечают по трафарету, как показано на рис. 1 (не приводится). Слой
в 3 мм с вертикальных сторон удаляют, что способствует выравниванию фронта
растворителя и улучшает разделение веществ.
Пробу и стандартные растворы наносят
медицинским шприцом строго в одну точку, чтобы диаметр пятна не превышал 5 - 6
мм.
Для получения количественных данных
каждый образец анализируют дважды: первый раз на пластинку по обе стороны от
пробы наносят в три точки стандартный раствор с содержанием пестицидов 1; 5 и
10 мкг (по ДДТ); второй раз содержание пестицидов в "стандарте"
подбирается с учетом данных первого определения.
В случае необходимости проведения
серийного анализа в производственных условиях можно наносить в одну точку
стандартный раствор с содержанием ДДТ - 0,5 мкг и три испытуемых пробы. При
необходимости количественной характеристики проб с остатками пестицидов больше
0,5 мкг анализ повторяют, как указано выше.
В качестве подвижного растворителя
используют 1-процентный раствор ацетона в гексане.
Содержание остатков пестицидов определяют
путем измерения на хроматограммах площадей пятен
веществ исследуемой пробы и стандарта со строго одинаковой интенсивностью
окраски. Для измерения площадей с хроматограммы
снимают копию на кальку, просветленную вазелиновым маслом. Площадь пятен
определяют путем наложения копий на кальке на миллиметровую бумагу. Формула для
расчета содержания остатков пестицидов в исследуемом образце (в мк/кг):
S х A х 1000
n
X = --------------,
S х 25 х 1000
c
где:
S -
площадь пятна вещества испытуемой пробы;
n
S -
площадь пятна вещества стандарта;
c
A - содержание вещества в пятне стандарта в
мкг;
25 - навеска образца, взятая для
определения в г.