Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
20 декабря 1976 г. N 1541-76
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2,4-ДИХЛОРФЕНОКСИУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ (2,4-Д)
В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ФУРАЖЕ, ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО
И ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ <*>
--------------------------------
<*> Методические указания
разработаны ВНИИГИНТОКС, ВНИИ фитопатологии.
Краткая
характеристика препарата. Эмпирическая
формула C H O Cl
,
8 6 3 2
молекулярная масса
221,04.
2,4-дихлорфеноксиуксусная
кислота (2,4-Д) -
белое кристаллическое вещество, стабильное при
хранении. Т. пл. 141 °С, т.
-3
кип. 160 °С при 0,4 мм
рт. ст. Константа диссоциации 2,3 х 10 .
Стабильна
при хранении
в растворах различных
органических растворителей и в
кристаллическом состоянии. При 20 °С 540 мг кислоты растворяется в 1 л
воды, 243
г кислоты - в 100 мл эфира, 130 г
кислоты - в 100 мл этилового
спирта, хорошо
растворяется в ацетоне, четыреххлористом углероде и бензоле.
Применяется для
борьбы с двудольными сорняками в посевах зерновых культур.
Методика определения 2,4-Д в воде, почве,
фураже, продуктах питания растительного и животного происхождения. Основные
положения. Принцип метода. Метод основан на экстракции 2,4-Д из гидролизованной
пробы органическим растворителем с последующим определением в виде метилового
эфира 2,4-Д с помощью газожидкостной хроматографии или в виде кислоты методом
тонкослойной хроматографии. С помощью предлагаемого метода можно определить
2,4-Д, находящуюся в анализируемой пробе как в
свободном, так и в связанном состоянии в виде конъюгатов
с эндогенными веществами растений. Количественное определение 2,4-Д проводится
методом внутреннего стандарта, который добавляется к пробе перед проведением
гидролиза. В качестве внутреннего стандарта используется
2,4,5-трихлорфеноксиуксусная кислота (2,4,5-Т).
Метрологическая характеристика метода.
Нижний предел определения газожидкостной хроматографией составляет: в воде -
0,002 мг/л, в почве - 0,01 мг/кг, в траве - 0,02, в сене - 0,1, в зерне - 0,02,
в молоке - 0,04, в сливочном масле - 0,1, в мясе (говядина) - 0,08 мг/кг.
Нижний предел определения методом тонкослойной хроматографии составляет: (в
виде 2,4-Д) в воде - 0,04, в молоке - 0,4 мг/л, в почве - 0,2 мг/кг, в траве -
0,06, в сене - 0,4, в зерне - 0,3, в сливочном масле - 0,8, в мясе (говядина) -
0,6 мг/кг; в виде метилового эфира 2,4-Д в воде - 0,01, в молоке - 0,1 мг/л, в
почве - 0,05 мг/кг, в траве - 0,08, в сене - 0,1, в зерне - 0,08, в сливочном
масле - 0,2, в мясе (говядина) - 0,15 мг/кг. Степень определения методом
тонкослойной хроматографии составляет, %: в воде - 90
- 95, в почве - 70 - 80, в траве - 60, в сене - 60, в молоке - 80, в сливочном
масле - 70, в мясе - 75, в зерне - 60.
Минимально детектируемое количество
метилового эфира 2,4-Д с помощью детектора постоянной скорости рекомбинации 2 нг, линейный динамический диапазон детектирования не менее
70 нг. Минимально открываемое количество 2,4-Д на
тонкослойных хроматограммах 1 мкг.
Реактивы и растворы. Азот особой чистоты.
Азотнокислое серебро, х.ч. Аммиак, 25-процентный
водный раствор. Ацетон, х.ч. Бикарбонат натрия,
3-процентный водный раствор. Гексан, х.ч. (перегнанный). Диметилсульфат,
5-процентный (в объемных процентах) раствор в абсолютном метиловом спирте. Диэтиловый эфир (перегнанный). Кальций сернокислый, х.ч., прокаленный при 160 °С в
течение 6 ч. Метиловый спирт абсолютный. Муравьиная кислота, х.ч. Насыщенный водный раствор хлористого натрия. Петролейный эфир (т. кип. 40 - 60 °С). Проявляющий реактив:
в мерную колбу на 100 мл помещают 0,5 г азотнокислого серебра, 5 мл
дистиллированной воды, 7 мл аммиака (25-процентный водный раствор) и доводят до
метки ацетоном. Силикагель КСК. Соляная кислота, х.ч.,
концентрированная. Соляная кислота, 6 н водный раствор. Соляная кислота, 2 н
водный раствор. Соляная кислота, водный раствор (1:1). Стандартный раствор
2,4-Д в метаноле с содержанием 100 мкг/мл. Стандартный раствор 2,4,5-Т в
метаноле с содержанием 2,5 мкг/мл. Стандартный раствор метиловых эфиров 2,4-Д
(10 мкг/мл) и 2,4,5-Т (2,5 мкг/мл) в метаноле.
Стандартный раствор метилового эфира
2,4-Д в гексане с концентрацией 100 мкг/мл. Сульфат
натрия безводный, х.ч. Фосфорно-вольфрамовая кислота,
х.ч., 40-процентный водный раствор. Хлористый натрий,
х.ч. Эфирный раствор диазометана.
Приборы и посуда. Газовый хроматограф с
детектором по захвату электронов ("Цвет-5", "Цвет-106" и
т.п.). Гомогенизатор (измельчитель тканей). Колбы
двугорлые, круглодонные на 500 и 250 мл. Делительная воронка на 500 мл. Колба
Бунзена на 500 мл. Воронка Бюхнера диаметром 15 см.
Грушевидные колбы на 100 мл. Ротационный испаритель ИР-1. Источник
ультрафиолетового света. Водяная баня. Центрифужные
пробирки. Контактный термометр на 100 °С. Мерные колбы на 5, 10 и 100 мл.
Вакуумный водоструйный насос. Холодильник Либиха. Камера хроматографическая.
Микропипетки. Медицинский шприц на 1 мл. Стеклянные пластинки размером 9 х 12
см. Сито капроновое 100 меш. Пульверизатор стеклянный.
Подготовка к определению связана с
получением диазометана из нитрозометилмочевины.
Для этого во взвешенную литровую круглодонную колбу помещают 200 г
24-процентного водного раствора метиламина (метиламин используется либо в виде
водного раствора, либо в виде хлоргидрата) и
добавляют при охлаждении 155 мл концентрированной соляной кислоты до кислой
реакции (индикатор метилрот). Затем приливают такое
количество воды, чтобы масса содержимого колбы достигла 500 г, и прибавляют 300
г мочевины. После этого содержимое колбы осторожно кипятят с
обратным холодильником 2 ч 45 мин. и энергично встряхивают 15 мин. Раствор в
колбе охлаждают до комнатной температуры, растворяют в нем 110 г 95-процентного
азотнокислого натрия и охлаждают до 0 °С. В трехлитровом стакане готовят смесь:
600 г льда и 100 г концентрированной серной кислоты, охлаждают содержимое
стакана смесью льда и соли. В этот стакан при перемешивании приливают
содержимое колбы (холодный раствор метилмочевины и
нитрата натрия) с такой скоростью, чтобы температура не поднималась выше 0 °С.
Получение нитрозометилмочевины проходит по следующим
реакциям:
CH NH х HCl
+ H N-CO-NH -> CH -NH-CO-NH + NH Cl;
3 2 2 2
3 2 4
CH -NH-CO-NH + HNO
-> CH -N(NO)-CO-NH + H O.
3 2
2 3 2
2
Нитрозометилмочевина всплывает на поверхность в виде мелких кристаллов, которые немедленно
отфильтровывают на воронке Бюхнера и хорошо
отсасывают под вакуумом. Затем кристаллы на фильтре размешивают до образования
пасты с 50 мл холодной дистиллированной воды, отсасывают и сушат в вакуум-эксикаторе. Выход нитрозометилмочевины
66 - 72% (105 - 115 г) от теоретического. Полученную таким образом нитрозометилмочевину
можно хранить в холодильнике длительное время. При температуре выше 20 °С ее не следует хранить более 1 ч. При температуре 30 °С нитрозометилмочевина может разложиться с выделением
газообразных продуктов.
Получение диазометана
из нитрозометилмочевины проходит по следующей
реакции:
CH N(NO)-CO-NH + KOH -> CH N + KCNO + 2H O.
3 2 2 2 2
В круглодонную колбу на 100 мл помещают 3
мл 50-процентного водного раствора едкого калия и 10 мл диэтилового
эфира. Смесь охлаждают до 5 °С, после чего при
взбалтывании прибавляют 1 г нитрозометилмочевины,
колбу присоединяют к холодильнику, нижний конец которого снабжен аллонжем с
отводом, проходящим через резиновую пробку и погруженным в слой эфира на дне
приемника. Приемник охлаждают смесью льда и соли.
Реакционную колбу помещают на водяную баню, нагретую до 50 °С. Эфирный раствор в колбе доводят
до кипения. Время от времени содержимое колбы перемешивают. Отгонку прекращают
после получения первых капель бесцветного дистиллята.
Ход анализа при газожидкостной
хроматографии. Экстракция и очистка экстракта из воды. Пробу воды 250 - 1000 мл
помещают в делительную воронку, подкисляют соляной кислотой до pH 3, прибавляют 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с
концентрацией 2,5 мкг/мл и экстрагируют тремя порциями диэтилового
эфира (100, 50 и 50 мл). Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную
воронку и экстрагируют 3-процентным водным раствором бикарбоната натрия (или
5-процентным водным раствором гидроортофосфата
натрия) (трижды по 50 мл). Объединенный водный раствор промывают двумя порциями
петролейного эфира (или гексана)
по 50 мл, отбрасывают этот эфир (гексан), а водный
раствор подкисляют соляной кислотой до pH 3 и трижды
экстрагируют диэтиловым эфиром по 50 мл. Объединенный
эфирный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) в течение 15 -
30 мин. при периодическом встряхивании и удаляют растворитель на ротационном
испарителе в грушевидной колбе на 100 мл, причем последние порции растворителя
удаляют током сухого воздуха. Сухой остаток в колбе метилируют,
используя диметилсульфат или диазометан.
Метилирование диметилсульфатом. К сухому остатку в колбе
приливают 3 мл 5-процентного раствора диметилсульфата
в абсолютном метиловом спирте, тщательно ополаскивают стенки колбы, прибавляют
1 г безводного сульфата натрия, присоединяют обратный холодильник и помещают на
водяную баню с температурой 55 °С на 10 мин. После
окончания реакции метилирования содержимое колбы
охлаждают под водопроводной водой, приливают 3 мл насыщенного раствора
хлористого натрия, 1 мл гексана, энергично встряхивают
в течение двух минут и после расслоения фаз вводят в хроматограф 3 мкл гексанового слоя.
Метилирование диазометаном. К сухому остатку в колбе
приливают эфирный раствор диазометана до появления
желтоватой окраски (при этом встряхивают содержимое колбы) и оставляют на 10
мин. Затем диэтиловый эфир удаляют током сухого
воздуха, а остаток растворяют в 0,5 - 1,0 мл гексана
и вводят в хроматограф 1 - 5 мкл раствора.
Хроматографирование.
Условия хроматографирования следующие. Хроматограф
"Цвет-106". Стеклянная спиральная
колонка (длина 2 м, внутренний диаметр 3
мм), заполненная хроматоном N (0,16 -
0,20 мм), силанизированным DMCS, с 5%
SE-30. Скорость
газа-носителя (азот особой
чистоты) через колонку 50
мл/мин., скорость
продувочного газа (азот особой
чистоты) через детектор
150 мл/мин.
Температура термостата колонок
170 °С,
испарителя 220 °С,
-12
термостата детектора
220 °С. Шкала
электрометра 20 х 10 А.
Скорость
диаграммной ленты
потенциометра 240 мм/ч. Относительное время удерживания
метилового эфира
2,4-Д в этих условиях 0,57. Абсолютное время удерживания 4
мин. 10 с.
Хроматографирование одной пробы проводят дважды. Измеряют на хроматограммах
высоты пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т, вычисляют средние значения
отношений этих высот из параллельных определений и по уравнению градуировочного графика находят содержание 2,4-Д в воде.
Для построения градуировочного графика к пробам воды
приливают 5, 10, 15 и 20 мкг 2,4-Д (в виде раствора в метиловом спирте), 1 мл
стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл и далее поступают так,
как это описано выше. Измеряют на хроматограммах
высоты пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т, вычисляют среднее значение
отношения этих высот из параллельных определений, строят график зависимости
отношения высот хроматографических пиков метиловых
эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т от содержания 2,4-Д в воде (мг/л). Полученный градуировочный график обрабатывают по методу наименьших
квадратов и получают уравнение градуировочной прямой
в виде:
Y = A + B X,
где:
Y - отношение высот хроматографических
пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т;
X - содержание 2,4-Д в воде, мг/л;
A и B - коэффициенты, которые получают
при обработке градуировочного графика по методу
наименьших квадратов.
Чтобы
повысить надежность идентификации
2,4-Д, для анализа
проб
целесообразно использовать колонки
с неподвижными фазами
различной
полярности (например,
SE-30 и ХЕ-60,
SE-30 и OV-17).
Условия
хроматографирования
при использовании фенилметилсиликона OV-17 следующие:
стеклянная спиральная
колонка (длина 2 м, внутренний
диаметр 3 мм),
заполненная хроматоном N (0,16 -
0,20 мм), силанизированным
DMCS, с 5%
OV-17. Скорость
тока газа-носителя (азот особой чистоты) через колонку 50
мл/мин., скорость
тока продувочного газа
(азот особой чистоты) через
детектор 150 мл/мин. Температура испарителя 220 °С, термостата колонок 200
-12
°С, термостата детектора 220 °С. Шкала
электрометра 20 х 10 А. Скорость
движения диаграммной
ленты потенциометра 240
мм/ч. Относительное время
удерживании метилового эфира 2,4-Д в этих условиях 0,63. Абсолютное
время
удерживания 6
мин. 48 с.
Экстракция и очистка экстракта из травы,
сена, зерна. Навеску травы 50 г гомогенизируют в 150 мл дистиллированной воды, гомогенат количественно переносят в круглодонную колбу на 1
л и приливают 38 мл концентрированной соляной кислоты. Навеску измельченного
зерна (50 г), соломы или сена (по 10 г) помещают в круглодонную колбу на 1 л и
приливают 150 мл 2 н водного раствора соляной кислоты. К подготовленным
образцам добавляют по 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с концентрацией 2,5
мкг/мл, перемешивают, к колбе присоединяют обратный холодильник и помещают на
кипящую водяную баню на 1 ч.
После охлаждения гидролизат
фильтруют через бумажный фильтр на воронке Бюхнера,
промывают осадок на фильтре без перемешивания тремя порциями по 30 мл 2 н
водного раствора соляной кислоты. К фильтрату добавляют 40-процентный водный
раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты до 2-процентной концентрации и фильтруют
через бумажный фильтр на воронке Бюхнера. Осадок на
фильтре трижды промывают 2 н водным раствором соляной кислоты порциями по 30
мл. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку и экстрагируют тремя
порциями диэтилового эфира (общий объем эфира равен
объему фильтрата). Эфирный экстракт промывают небольшими количествами (15 - 20
мл) дистиллированной воды до нейтральной реакции промывных вод и затем
экстрагируют тремя порциями (по 50 мл) 5-процентного водного раствора гидроортофосфата натрия (или раствора бикарбоната натрия).
Водные экстракты объединяют, подкисляют
концентрированной соляной кислотой до pH 1 и
экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира (75 +
50 + 50 мл). Объединенный эфирный экстракт после промывания
небольшими (15 - 20 мл) порциями дистиллированной воды до нейтральной реакции
промывных вод сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) в течение 15 - 30
мин. при периодическом встряхивании, и растворитель удаляют на роторном
испарителе в грушевидной колбе на 100 мл, последние порции растворителя удаляют
током сухого воздуха.
Сухой остаток растворяют в 0,5 мл ацетона и раствор наносят в виде полосы на стеклянную
пластинку (5 х 20 см) с тонким слоем (0,4 мм) силикагеля КСК и дважды хроматографируют в системе растворителей петролейный эфир (или гексан) - диэтиловый эфир - муравьиная кислота (50:50:2). Затем
снимают силикагель с пластинки площадью 1 кв. см с Rf
2,4-Д 0,5 - 0,6 и количественно переносят в коническую колбу с притертой
пробкой на 50 мл. Смачивают силикагель в колбе 1 мл дистиллированной воды,
приливают 4 - 5 мл ацетона, встряхивают 1 - 2 мин. и фильтруют через бумажный
фильтр. Обработку силикагеля ацетоном проводят еще трижды. Объединенный
ацетоновый экстракт сушат над безводным сульфатом натрия, удаляют растворитель
на роторном испарителе, затем проводят метилирование
образца и газохроматографическое определение 2,4-Д так, как это описано выше.
Для построения калибровочного графика в
пробы травы, зерна, сена или соломы вносят 10, 15, 20 и 25 мкг 2,4-Д в виде
раствора в метиловом спирте, 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием
2,5 мкг/мл и далее поступают так, как это описано выше.
Экстракция и очистка экстракта из сухой
почвы. Пробу сухой почвы 100 г, растертой и просеянной через
сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в коническую колбу на 500 мл с пришлифованной
пробкой, приливают 25 - 35 мл дистиллированной воды, 5 мл концентрированной
соляной кислоты, 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл,
тщательно перемешивают, прибавляют 150 мл ацетона и помещают на аппарат для
встряхивания на 1 ч. Затем растворитель отфильтровывают под вакуумом на
воронке Бюхнера через бумажный фильтр, почву на
фильтре трижды промывают ацетоном по 20 мл. После этого ацетон удаляют на
роторном испарителе, остаток из колбы переносят 100 мл дистиллированной воды в
делительную воронку, экстрагируют тремя порциями диэтилового
эфира (75, 50 и 50 мл) и далее поступают так, как это описано при определении
2,4-Д в воде.
Для построения градуировочного
графика в пробы почвы вносят 10, 15, 20 и 25 мкг 2,4-Д в виде раствора в
метиловом спирте, 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл и
далее поступают, как описано выше.
Экстракция и очистка экстракта из влажной
почвы. Пробу влажной почвы 100 - 200 г помещают в коническую
колбу на 500 мл с притертой пробкой, приливают 5 - 10 мл концентрированной
соляной кислоты, 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл,
150 - 300 мл ацетона, тщательно перемешивают, помещают на аппарат для
встряхивания на 1 ч и далее поступают так, как описано выше.
Экстракция и очистка экстракта из молока.
В пробу молока 25 - 50 мл вносят 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с
концентрацией 2,5 мкг/мл, прибавляют концентрированную соляную кислоту 4,4 -
8,8 мл, помещают в круглодонную колбу на 250 мл, присоединяют обратный холодильник
и помещают на кипящую водяную баню на 1 ч для гидролиза. После охлаждения в
колбу приливают 15 мл 40-процентного водного раствора фосфорно-вольфрамовой
кислоты, тщательно встряхивают, затем добавляют 100 мл дистиллированной воды и
содержимое фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера.
Остаток на фильтре промывают 2 н водным раствором соляной кислоты, фильтрат
экстрагируют диэтиловым эфиром трижды по 50 мл и
далее поступают так, как это описано выше.
Для построения градуировочного
графика в пробы молока (25 - 50 мл) вносят 2, 5, 10 и 20 мкг 2,4-Д (в виде
раствора в метиловом спирте), 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием
2,5 мкг/мл, концентрированную соляную кислоту 4,4 - 8,8 мл и далее поступают
так, как описано выше.
Экстракция и очистка экстракта из
сливочного масла. Пробу масла 25 г растворяют в 100 мл гексана, вносят 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с
содержанием 2,5 мкг/мл, помещают в двугорлую круглодонную колбу на 500 мл,
приливают 100 мл 6 н соляной кислоты, присоединяют обратный холодильник и
помещают на кипящую водяную баню на 1 ч, перемешивая содержимое колбы с помощью
электромешалки. После охлаждения содержимого
колбы слои разделяют в делительной воронке, и водный слой экстрагируют диэтиловым эфиром 2 раза по 50 мл. Гексановый
слой экстрагируют 100 мл 6 н соляной кислоты. Затем водный слой экстрагируют диэтиловым эфиром дважды по 50 мл, и данный экстракт
объединяют с первоначальным эфирным экстрактом. После этого из объединенного
эфирного экстракта 2,4-Д извлекают 0,4 н водным раствором бикарбоната натрия и
далее поступают так, как описано при определении гербицида в молоке.
Для построения градуировочного
графика в пробы масла 25 г, растворенные в 100 мл гексана,
вносят 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с концентрацией 2,5 мкг/мл, 10, 15,
20 и 25 мкг 2,4-Д в виде раствора в метиловом спирте. Далее поступают так, как
это описано выше.
Экстракция и очистка экстракта из мяса. Пробу мяса 25 - 50 г измельчают с помощью мясорубки, помещают в
двугорлую круглодонную колбу на 500 мл, вносят 1 мл стандартного раствора
2,4,5-Т с концентрацией 2,5 мкг/мл, приливают 100 - 200 мл 6 н соляной кислоты,
присоединяют обратный холодильник и помещают на водяную баню (с температурой
100 °С) на 1 ч, перемешивая содержимое колбы с помощью электромешалки.
После охлаждения в колбу приливают 15 мл 40-процентного водного раствора
фосфорно-вольфрамовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды и содержимое колбы
фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера. Остаток на
фильтре промывают 2 н водным раствором соляной кислоты, фильтрат экстрагируют диэтиловым эфиром трижды по 50 мл и далее поступают так,
как это описано выше.
Для построения градуировочного
графика в пробы мяса вносят 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием
2,5 мкг/мл, 10, 15, 20 и 25 мкг 2,4-Д в виде раствора в метиловом спирте и
далее поступают так, как это описано выше.
Ход анализа при тонкослойной
хроматографии. Экстракция и очистка экстрактов. При количественном определении
содержания 2,4-Д методом тонкослойной хроматографии подготовку образца и
очистку экстракта проводят таким же образом, как при анализе гербицида
газохроматографическим методом, за исключением того, что 2,4,5-Т в пробы не
вносят.
Полученный после очистки объединенный
эфирный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают растворитель
на ротационном испарителе в грушевидной колбе на 100 мл до небольшого объема (1
- 2 мл).
Хроматографирование. Упаренный экстракт с помощью капилляра или медицинского шприца на 1
мл количественно наносят на хроматографическую
пластинку (9 х 12 см) с тонким слоем силикагеля КСК, закрепленного гипсом.
Затем на хроматографическую пластинку наносят 2,5 и
10 мкг 2,4-Д в виде раствора ацетона и проводят хроматографирование
в системе растворителей петролейный эфир (или гексан) - диэтиловый эфир -
муравьиная кислота (50:50:2). После окончания процесса хроматографирования
пластинку извлекают из хроматографической камеры и
сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для обнаружения зоны локализации 2,4-Д
пластинку обрабатывают раствором азотнокислого серебра в смеси с
дистиллированной водой, аммиаком и ацетоном, сушат и облучают ультрафиолетовым
светом в течение 10 - 15 мин. Если в пробе есть 2,4-Д, то на пластинке
появляется серо-черное пятно на белом фоне с величиной Rf
0,5. Количественное определение 2,4-Д проводят путем визуального сравнения
размера и интенсивности окраски пятен стандарта с пятном пробы. Минимально
детектируемое количество 2,4-Д на хроматографической
пластинке 1 мкг.
Перед проведением серийных анализов
необходимо определить открываемость метода, т.е.
процент возврата 2,4-Д из контрольных проб, к которым предварительно были
добавлены различные количества гербицида.
Для повышения надежности идентификации
2,4-Д, особенно при анализе проб с неизвестными обстоятельствами загрязнения,
целесообразно после проведения газохроматографического определения содержания
гербицида оставшуюся часть пробы анализировать с помощью тонкослойной
хроматографии. Для этого гексановый экстракт наносят
на хроматографическую пластинку (9 х 12 см) с тонким
слоем силикагеля КСК, рядом наносят 2 - 10 мкг метилового раствора 2,4-Д в виде
раствора в гексане и хроматографируют
в системе растворителей гептан - ацетон (9:3). Далее поступают так, как это
описано выше. Величина Rf метилового эфира 2,4-Д 0,46
- 0,47.
Сочетание величины времени удерживания и
величины Rf метилового эфира 2,4-Д в сравнении с
этими же показателями, полученными для стандартного соединения, позволяет более
надежно проводить определение остаточных количеств 2,4-Д в анализируемых
образцах.
Обработка результатов анализа.
Газожидкостная хроматография. Для определения содержания 2,4-Д в пробах (X,
мг/л или мг/кг) методом газожидкостной хроматографии используют следующую
формулу:
Y - A
X = -----,
B
где:
Y - отношение высот хроматографических
пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т;
A и B - коэффициенты, которые получают
при обработке градуировочных графиков по методу
наименьших квадратов.
Тонкослойная хроматография. Для
определения содержания 2,4-Д в пробе (X, мг/л или мг/кг) методом тонкослойной
хроматографии применяют следующую формулу:
A
X = -,
P
где:
A - количество 2,4-Д в пробе, найденное
сравнением со стандартом, мкг;
P - объем или масса пробы, мл или г.
Для определения содержания в пробе
натриевой, диметилдиэтил- или триэтаноламинных солей 2,4-Д
полученный результат необходимо соответственно умножить на 1,1; 1,46 и 1,67.